流式细胞术

第一章 概述

第一节 什么是流式细胞术？

第二节 流式细胞术能做什么？

第三节 背景与回顾

第四节 仪器简介

一、 BD公司

二、 Beckman Coulter公司

三、 ABI公司

四、 Union Biometrica公司

五、 Apogee 公司

六、 Partec公司

七、 Merck Millipore公司

第五节 前景与展望

一、 流式细胞术与显微技术结合

二、 流式细胞术与质谱技术结合

第一章 概述

第一节 什么是流式细胞术？

第二节 流式细胞术能做什么？

第三节 背景与回顾

第四节 仪器简介

一、 BD公司

二、 Beckman Coulter公司

三、 ABI公司

四、 Union Biometrica公司

五、 Apogee 公司

六、 Partec公司

七、 Merck Millipore公司

第五节 前景与展望

一、 流式细胞术与显微技术结合

二、 流式细胞术与质谱技术结合

参考文献

第二章 流式细胞术原理

第一节 工作原理

第二节 液流系统

一、 鞘液

二、 喷嘴

三、 流式照射室

第三节 光学检测系统

一、 激光和荧光

二、 激光照射液流

三、 光学信号

四、 光学元件

五、 光学信号检测系统

第四节 电子控制系统

一、 光电检测器

二、 通道

三、 阈值

小结

参考文献

第三章 数据储存与分析系统

第一节 数据储存

第二节 数据分析

一、 常用术语

二、 流式图谱的表现形式

三、 荧光补偿

第三节 数据分析实例

实例一： 双参数FSC/SSC分析

实例二： 三参数FSC/SSC/FL1分析

实例三： 四参数FSC/SSC/FL1/FL2简单样本分析

实例四： 四参数FSC/SSC/FL1/FL2复杂样本分析

小结

参考文献

第四章 细胞分选

第一节 细胞分选的原理

一、 液滴形成

二、 延迟时间

三、 液滴充电与偏转

四、 液滴的收集

第二节 影响分选的因素

一、 分选速度

二、 分选门的设定

三、 分选模式

第三节 分选的质量控制与评价

一、 分选的准确性

二、 分选的效率

三、 无菌分选

四、 分选对细胞活性的影响

第四节 分选前的准备

一、 分选用细胞的制备要求

二、 准备的材料

三、 分选时需要考虑的几个问题

第五节 细胞分选的应用实例

实例一： 单细胞分选

实例二： 回收极低比例（<0.01%）的细胞

实例三： 纯化稳定的细胞系

实例四： 淋巴细胞分选

实例五： 组织特异性干细胞分选

实例六： 染料排异性干细胞分选

实例七： 精子分选

小结

参考文献

第五章 细胞表面标志的检测

第一节 血液细胞的检测

第二节 细胞表面标志的染色技术

一、 细胞表面分化抗原

二、 直接染色法和间接染色法

第三节 对照的设置

一、 阴性对照

二、 同型对照

三、 阳性对照

四、 荧光补偿

第四节 定量测定

一、 外标法

二、 内标法

三、 标准曲线法

四、 分辨率

第五节 设门的策略

一、 设门

二、 检验门

三、 荧光设门

四、 多色流式分析实例

小结

参考文献

第六章 细胞内成分的检测

第一节 流式细胞术检测细胞内蛋白的特点

第二节 细胞内蛋白染色通则

一、 细胞内蛋白染色的步骤

二、 细胞内蛋白染色应遵循的原则

第三节 磷酸化蛋白的检测

一、 固定和通透细胞

二、 荧光抗体染色

三、 优化染色方法

四、 多种磷酸化蛋白同时检测

第四节 细胞因子的检测

一、 T淋巴细胞的细胞因子检测

二、 单核细胞的细胞因子检测

三、 细胞内蛋白检测的优缺点

第五节 微球免疫测定法

一、 CBA方法的原理

二、 CBA方法的流程

三、 CBA方法的检测范围

四、 CBA方法的优缺点

第六节 磷酸化蛋白与DNA同时检测

小结

参考文献

第七章 细胞核成分的检测

第一节 常用的DNA染料

第二节 细胞周期

一、 细胞周期的定量分析方法

二、 粘连细胞的分析

三、 画门方法

四、 BrdU/PI双参数分析细胞周期

第三节 细胞周期的动态分析

一、 BrdU/PI双参数检测

二、 Hoechst/PI双参数检测

第四节 DNA总量分析和倍体分析

一、 DNA总量分析

二、 正常生物体的倍体分析

三、 肿瘤细胞的非整倍体分析

四、 植物倍体的分析

第五节 细胞同步化

一、 自然同步化

二、 人工同步化

第六节 DNA与RNA同时检测

一、 吖啶橙（AO）同时检测DNA与RNA

二、 Hoechst 33342/Pyronin Y同时检测DNA和RNA

第七节 DNA与蛋白质同时检测

一、 DNA和总蛋白同时检测

二、 DNA和细胞周期蛋白同时检测

第八节 染色体分析

小结

参考文献

第八章 细胞增殖与死亡的检测

第一节 细胞增殖的检测

第二节 细胞凋亡的检测

一、 散射光的检测

二、 caspases酶检测

三、 线粒体膜电位的检测

四、 质膜的检测

五、 DNA检测

六、 细胞衰老与端粒测定

第三节 坏死细胞的检测

一、 散射光的检测

二、 膜通透性的检测

第四节 细胞凋亡、死亡检测中存在的问题

一、 细胞凋亡的频率可能与细胞死亡的发生率无关

二、 以DNA片段来估计细胞凋亡频率的困难

三、 将凋亡小体或核碎片误判为凋亡细胞

四、 细胞凋亡、细胞坏死、细胞凋亡的"坏死阶段"

五、 样品制备过程中凋亡细胞的选择性丢失

六、 吞噬凋亡小体的活细胞伪装成凋亡细胞

七、 商业试剂/试剂盒存在的问题

八、 细胞形态仍然是鉴定凋亡细胞的黄金标准

小结

参考文献

第九章 流式细胞术的应用概述

第一节 流式细胞术在生物学研究中的应用

一、 在细胞生物学中的应用

二、 在细胞周期研究和DNA倍体分析中的应用

三、 在细胞凋亡分析中的应用

四、 在染色体核型分析中的应用

五、 在分子遗传学中的应用

六、 在免疫学中的应用

七、 在植物学中的应用

第二节 流式细胞术在医学研究及临床中的应用

一、 在肿瘤学中的应用

二、 在临床细胞免疫学中的应用

三、 在血液病治疗中的应用

四、 在血栓与出血性疾病治疗中的应用

五、 生物学领域的其他应用

第三节 流式细胞术在农林畜牧养殖业中的应用

一、 在植物学中的应用

二、 在家畜性别控制中的应用

三、 在家畜疾病监控与预防中的应用

第四节 流式细胞术在微生物学中的应用

一、 在病原微生物研究中的应用

二、 在环境微生物研究中的应用

第五节 流式细胞术在食品、药品检测方面的应用

一、 在食品检测中的应用

二、 在药品检测中的应用

第六节 流式细胞术新技术的应用

一、 CBA方法

二、 定量流式细胞术

小结

参考文献

第十章 样本制备和染色方法

第一节 单细胞悬液的制备

一、 小鼠末梢血的采集和单细胞悬液的制备

二、 小鼠胸腺的分离和单细胞悬液的制备

三、 小鼠骨髓的采集和单细胞悬液的制备

四、 密度梯度离心法制备外周血单个核细胞悬液

五、 小鼠脾脏的分离和单细胞悬液的制备

六、 小鼠成体乳腺单细胞悬液的制备

七、 小鼠胰腺细胞悬液的制备

第二节 荧光素标记抗体的制备

一、 FITC/ Texas Red 标记

二、 生物素标记

三、 Allophycocyanin（APC）或者Phycoerythrin（PE）标记

第三节 分析和分选用的细胞染色

一、 流式分析用的细胞染色方法

二、 流式分选用的细胞染色方法

三、 SP细胞的染色方法

四、 流式分选用的精子染色方法

第四节 细胞内分子染色

一、 常用的细胞固定方法

二、 细胞内分子的染色方法

三、 细胞内和细胞外分子同时染色的方法

第五节 细胞周期染色

一、 固定全细胞的PI染色方法

二、 非固定细胞的无洗染色方法

三、 BrdU染色方法

四、 植物细胞的DNA染色方法

第六节 细胞同步化实验方法

一、 过剩胸腺嘧啶脱氧核苷法--S期细胞同步化

二、 羟基脲法--S期细胞同步化

三、 秋水仙胺法--M期细胞同步化

四、 血清饥饿法--G0期细胞同步化

五、 G1期和G2期细胞同步化实验方法

第七节 DNA和RNA同时染色

一、 Hoechst 33342/PY同时检测DNA和RNA

二、 吖啶橙（AO）同时检测DNA和RNA

第八节 细胞凋亡染色

一、 PI染色法--DNA凋亡峰的检测

二、 Annexin V/PI双染色法

三、 Hoechst 33342/PI双染色法

四、 TUNEL染色法

小结

参考文献

附录

一、 流式细胞术相关网址

二、 流式细胞术相关实验方法网址

三、 荧光素试剂公司

四、 荧光光谱网址

五、 荧光素激发和发射光谱一览表

流式细胞术是现代生物学和医学的常用技术，一经发明就被逐渐应用到细胞生物学、免疫学、发育生物学、生理学、植物学、分子生物学等基础研究，医学的临床诊断和治疗，以及农林畜牧养殖、药品检验、食品检验、环境检测等广泛的领域。
　　作者结合十多年的流式经验，注重理论和实际、基础和应用相结合，重点介绍了流式细胞术的原理、技术及方法，及时跟踪展现了其最新成果和发展趋势。书中列举了大量有代表性的应用实例，详细描述了其操作过程、实验结果及详尽的分析方法等，可为相关领域的科研和技术人员提供有力的技术支持。《流式细胞术（第二版）》可操作性强，图文并茂。在第一版基础上，（1）新版的部分章节改用了彩色图谱，更便于读者使用；（2）增加了“细胞增殖与死亡的检测”一章，详细描述流式细胞术在具体实验中的应用方法；（3）各章节中都及时添加了最新进展和方法。
　　《流式细胞术（第二版）》可作为高校生物、医学、农林等高年级本科生、研究生教材，也可供科研人员和检验人员参考。

　　流式细胞术是现代生物学和医学的常用技术，一经发明就被逐渐应用到细胞生物学、免疫学、发育生物学、生理学、植物学、分子生物学等基础研究，医学的临床诊断和治疗，以及农林畜牧养殖、药品检验、食品检验、环境检测等广泛的领域。
　　作者结合十多年的流式经验，注重理论和实际、基础和应用相结合，重点介绍了流式细胞术的原理、技术及方法，及时跟踪展现了其最新成果和发展趋势。书中列举了大量有代表性的应用实例，详细描述了其操作过程、实验结果及详尽的分析方法等，可为相关领域的科研和技术人员提供有力的技术支持。《流式细胞术（第二版）》可操作性强，图文并茂。在第一版基础上，（1）新版的部分章节改用了彩色图谱，更便于读者使用；（2）增加了“细胞增殖与死亡的检测”一章，详细描述流式细胞术在具体实验中的应用方法；（3）各章节中都及时添加了最新进展和方法。
　　《流式细胞术（第二版）》可作为高校生物、医学、农林等高年级本科生、研究生教材，也可供科研人员和检验人员参考。