蛋白质化学与蛋白质组学

前言

第四版前言

致谢

缩略语

1常规技术

1．1缓冲液的配制

1．2蛋白质定量

1．2．1BCA法

1．2．2Bradford法

1．2．3Lowry法

1．2．4Starcher法

1．2．5比色法测定蛋白质的浓度

1．3凝胶电泳

1．3．1SDS凝胶

1．3．2快捷法：无堆积胶的SDS凝胶电泳

1．3．3天然凝胶

1．4凝胶染色

1．4．1固定

1．4．2染色

1．4．3干胶

1．5沉淀和浓缩

1．5．1变性沉淀

1．5．2天然沉淀

1．5．3浓缩

1．6印迹

1．6．1蛋白质印迹显色

1．6．2封闭

1．6．3免疫显色

1．6．4Ca2+结合

1．6．5配体显色

1．7凝胶和印迹的放射自显影

2配体结合

2．1放射性配体标记

2．1．1肽和蛋白质的碘化

2．1．2第二天——碘化过程的问题和对策

2．1．3低分子量分子的碘化

2．1．4碘化组分的纯化

2．1．5碘化法的优点和缺点

2．1．6氚标记

2．2结合

2．2．1膜的分离

2．2．2结合实验

2．2．3膜结合实验

2．2．4膜结合实验的改进

2．2．5可溶性蛋白的结合实验

2．2．6无法结合

2．3结合数据的分析

2．3．1平衡态结合反应

2．3．2动力学

2．4配体交联2．4．1三组分交联(3C交联)

2．4．2光亲和交联

2．4．3交联实验的对照

2．5结合蛋白的用途

3膜蛋白的溶解

3．1去垢剂

3．1．1名词解释

3．1．2去垢剂的使用

3．2溶解

3．2．1溶解的标准

3．2．2溶解膜蛋白的物理参数

4通过功能测定检测蛋白质

4．1转运体

4．1．1脂质体

4．1．2蛋白脂质体

4．2膜蛋白的重组还原

4．2．1从溶液中重组

4．2．2重组人预先形成的脂质体

4．3通量实验

4．3．1流入检验

4．3．2流出检验

4．4一些建设性的意见

5去除杂质和纯化

5．1纯粹娱乐——蛋白质纯化的过程

5．2常规纯化方法

5．2．1柱层析技术

5．2．2基于分子量差异的纯化

5．2．3基于电荷差异的纯化

5．2．4疏水层析

5．2．5蓝色凝胶

5．3亲和层析

5．3．1凝集素层析

5．3．2配体层析

5．4纯度检验

5．5纯化蛋白的作用

6抗体

6．1多克隆抗体的获得

6．1．1抗原

6．1．2佐剂

6．1．3注射抗原和取血清

6．1．4抗体纯化

6．2免疫沉淀

6．2．1利用固定化蛋白A进行免疫沉淀

6．2．2利用固定化抗体进行免疫沉淀

6．3免疫亲和层析

6．4不纯蛋白的抗体

6．5免疫学检测技术

7蛋白质组学

7．1简介

7．2取样7．3双向凝胶电泳

7．4肽和蛋白质质谱

7．4．1质谱仪

7．4．2MALDI质谱的样品制备

7．4．3MALDI和ESI质谱的用途

7．5蛋白质芯片

7．5．1应用SELDI技术的蛋白质芯片

7．5．2幸运饼干——蛋白质芯片的可行性

7．5．3适配体

7．6微序列分析

7．6．1蛋白质样品准备

7．6．2封闭的N-末端

7．6．3蛋白质裂解成肽段

7．6．4Edman降解

7．6．5羧基端序列分析

7．6．6肽段的阶梯序列分析

7．7策略性的观点

8亚基

8．1亚基的数量与比例

8．1．1关于确定亚基比例的难点

8．1．2X_射线结构解析确定亚基数量与比例

8．1．3杂交实验确定亚基数量与比例

8．1．4交联实验确定亚基数量与比例

8．1．5氨基酸分析或抗体法确定亚基数量与比例

8．2什么力量使我们在一起?——亚基问的结合

9糖蛋白

9．1蛋白质糖基化的方式、位点和作用

9．2凝胶电泳检测糖蛋白

9．3印迹法检测糖蛋白

9．3．1非选择性糖蛋白显色

9．3．2选择性(凝集素)显色

9．4脱糖基化

9．4．1糖基化抑制剂

9．4．2内切糖苷酶

9．4．3化学法脱糖基化

9．5糖链

9．5．1单糖组分

9．5．2结构与序列

10凝聚宝藏：论文的写作

10．1关于论文

10．2关于论文写作

11沙漠探险：文献的调研

最后的话

附录A专业资源

A．1供应商

A．2产品供应商

索引

　　在实验中，你是否严格遵循标准流程却一无所获?你是否想改进你的工作7你想更多地了解某一研究领域的各种方法吗?或许“实验者”丛书将对你有所帮助。本书是“实验者”系列中的一本，从权威人士的视点，为你讲述蛋白质生物化学和蛋白质组学研究的新方法。你能够充分体会到作者饱尝了实验室的挑战带给他们的激动和沮丧。有了这些技巧和诀窍，你的实验成功的几率将更高。但这本颇有价值的实验室手册并非只是一部方法集锦。本书适于生物化学与分子生物学、遗传学、功能基因组学、蛋白质生物化学和蛋白质组学等生命科学相关领域的研究所、高校相关院系实验室的教师、研究生、科研人员，以及生物技术企业的研发者和决策者参考使用。