生物化学实验技术

第一部分理论部分

1.1离心技术

1.1.1离心沉降速率影响因素

1.1.2沉降系数

1.1.3离心设备

1.1.4制备超离心法

1.1.5离心操作的注意事项

参考文献

1.2层析技术

1.2.1层析的基本概念

1.2.2层析的基本理论

1.2.3层析法的分类

1.2.4柱层析的基本装置及操作

1.2.5常用的层析方法

参考文献

1.3电泳技术

1.3.1电泳的基本原理

1.3.2影响电泳的主要因素

1.3.3电泳的分类

1.3.4电泳系统

1.3.5醋酸纤维素薄膜电泳

1.3.6聚丙烯酰胺凝胶电泳

1.3.7SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

1.3.8连续梯度电泳

1.3.9等电点聚焦电泳

1.3.10双向电泳

1.3.1l琼脂糖凝胶电泳

1.3.12毛细管电泳

参考文献

1.4生物大分子的制备

1.4.1生物大分子制备的前处理

1.4.2生物大分子的分离纯化

参考文献

第二部分基本实验

2.1基础训练

2.1.1生物化学实验要求

2.1.2生物样品的采取、处理与保存

2.1.3高等植物材料丙酮粉的制备

2.1.4缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质测定

参考文献

2.2蛋白质和氨基酸实验

2.2.1蛋白质的两性性质及等电点的测定

2.2.2氨基酸的薄层层析

2.2.3考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量

2.2.4紫外吸收法测定蛋白质含量

2.2.5双缩脲法测定蛋白质含量

2.2.6Folin-酚法测定蛋白质含量

2.2.7蛋白质的沉淀与变性反应

2.2.8蛋白质脱盐(透析和凝胶过滤)

2.2.9用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N端氨基酸

2.2.10等电点聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

参考文献

2.3酶学实验

2.3.1酶的基本性质

2.3.2过氧化氢酶活力的测定

2.3.3脲酶(urease)Km值简易测定法

2.3.4淀粉酶活力测定

2.3.5转氨酶活性鉴定(纸层析法)

2.3.6植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)的提取及活性测定

2.3.7同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳

参考文献

2.4分子生物学基础实验

2.4.1质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测

2.4.2聚合酶链反应(PCR)技术体外扩增DNA

2.4.3大肠杆菌感受态的制备和转化实验

2.4.4PCR产物的T-A克隆及重组子的蓝白斑筛选

2.4.5植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析

参考文献

2.5糖、脂、维生素实验

2.5.1蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量

2.5.2还原糖含量测定砷钼酸比色法

2.5.3糖的薄层层析

2.5.4维生素A的含量测定

2.5.5维生素C含量测定2，6-二氯酚靛酚法

2.5.6粗脂肪含量的测定索氏抽提法

参考文献

第三部分综合性实验

3.1酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究

3.1.1蔗糖酶的提取与部分纯化

3.1.2离子交换柱层析纯化蔗糖酶

3.1.3蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定

3.1.4分离产物的SDS-PAGE电泳检测

3.1.5反应时间对产物浓度的影响

3.1.6pH对蔗糖酶活性的影响

3.1.7温度对蔗糖酶活性的影响和反应活化能的测定

3.1.8底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数Km和最大反应速度Vmax的测定

3.1.9尿素(脲)抑制蔗糖酶的实验

参考文献

3.2溶菌酶的分离纯化

3.2.1溶菌酶的粗提液的制备

3.2.2离子交换柱层析纯化溶菌酶

3.2.3溶菌酶的透析与浓缩

3.2.4凝胶过滤层析纯化溶菌酶

3.2.5溶菌酶的活性测定

3.2.6溶菌酶纯度的鉴定

参考文献

3.3猪血超氧化物歧化酶的分离纯化、活性测定及同工酶鉴定

3.3.1猪血SOD的提取纯化

3.3.2超氧化物歧化酶活性测定

3.3.3SOD同工酶鉴定

参考文献

3.4种子蛋白质系统分析

3.4.1种子蛋白质含量测定(凯氏定氮法)

3.4.2种子蛋白质氨基酸组分分析(氨基酸自动分析仪法)

3.4.3种子蛋白质组分分析(连续累进提取法)

3.4.4种子蛋白质亚基分析(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法)

参考文献

第四部分附录

一、实验室安全及防护知识

二、各种仪器的使用注意事项

三、凝胶数据表

四、常用缓冲溶液的配制方法

五、硫酸铵饱和度的常用表

六、离心力与离心机转速测算表

　　本教材的内容主要包括三部分：首先，重点介绍了常用生化实验技术的基本原理，包括层析技术、电泳技术等。把实验原理集中起来，使这些涉及生物大分子分离、纯化、检查的常规技术系统化，有利于学生理解实验操作，尽快掌握有关的基本技能。第二部分设置了32个普通生化实验，适合于对生物学相关专业学生进行基本的生化实验技能训练，以便增加学生的感性认识，与理论课教学相辅相成。第三部分安排了4个综合性大实验，通过这部分9实验，不但可以把前面的有关知识和技能系统化、集成化，而且更贴近现代生化科研实践，对于学生进一步学习其他相关课程或从事科研有直接的帮助和更为久远的影响。　　本书是普通高等教育“十一五”国家级规划教材，是编者在多年生物化学实验教学基础上，为生物类及农科各专业本科生生物化学实验课编写的教材。教材理论部分介绍了离心技术、层析技术、电泳技术及生物大分子制备技术。实验部分包括生物化学基本实验和生物化学综合性实验两大部分。基本实验适用于生物类和农科各专业生物化学实验的基本训练；综合性实验可用于生物技术等专业进行科研模拟训练，也可用于研究生“生物化学研究技术”课程。书末附录包括了生物化学常规仪器设备操作注意事项、常用试剂、溶液配制及常用数据列表等内容。　　本书内容全面，实用性强，重视设计性和综合性实验，兼具广度和深度，主要作为高等农林院校本科生教材，也可供综合性大学、师范院校本科生使用，还可作为相关教学和研究人员的参考书。