基因工程实验

基础性实验篇

第1章 核酸的分离与纯化技术

实验1.1 基因组DNA的提取

实验1.2 质粒DNA的提取与纯化

实验1.3 总RNA和mRNA的制备

第2章 电泳技术

实验2.1 DNA琼脂糖凝胶电泳

实验2.2 RNA琼脂糖凝胶电泳

实验2.3 从低熔点胶琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段

实验2.4 SDS一聚丙酰胺凝胶电泳

第3章 DNA扩增和CDNA文库的构建

实验3.1 聚合酶链反应扩增目的DNA

实验3.2 CDNA文库的构建

实验3.3 定量PCR

第4章 重组质粒的连接与转化

实验4.1 限制性内切酶的酶切反应

实验4.2 外源DNA和质粒载体的连接反应

实验4.3 大肠杆菌感受态细胞的制备

实验4.4 重组质粒的转化与选择

第5章 重组子的筛选与鉴定

实验5.1 Southern印迹杂交

实验5.2 Northern印迹杂交

实验5.3 菌落原位杂交

实验5.4 斑点杂交

实验5.5 Western印迹杂交

综合性实验篇

第6章 工程菌的构建、培养与目的产物的分离纯化

实验6.1 工程菌的构建

实验6.2 高表达工程菌株的筛选与保藏

实验6.3 工程菌生长曲线分析

实验6.4 重组产物表达影响因素实验

实验6.5 工程菌发酵工艺实验

实验6.6 表达产物的分离纯化

附 录

附录1 基因工程操作中常用的溶液和缓冲液

附录2 培养基与试剂的配制

附录3 常用抗生素

附录4 常用缩略语

附录5 常用仪器设备

附录6 梯度PCR仪的介绍及使用说明

陈蔚青主编的《高等院校生物类专业系列教材：基因工程实验》介绍了基因工程的基本操作技术与实验手段。内容包括基因组DNA的提取，质粒DNA的提取，总RNA和mRNA的分离提取，核酸和蛋白质的凝胶电泳，DNA扩增和cDNA文库的构建，限制性内切酶的酶切反应，重组质粒的连接、转化及鉴定，大肠杆菌感受态细胞的制备，Southern印迹杂交，western印迹杂交，外源基因在大肠杆菌中的诱导表达，基因表达产物的检测分析和分离纯化等技术。书末附有基因工程操作中常用的溶液和缓冲液、基因工程实验室常规仪器设备等资料。
本教材本着实用、可行的原则进行内容设计，涵盖了基因工程的常用实验方法和技术，并吸收了近年来发展起来的新技术和新方法，内容具有普及性与连贯性，且通过综合性实验的设计以培养学生的科研能力。本教材主要面向生物工程、生物技术专业应用型本科学生，既可作为实验教材，也可作为基因工程实验教学的参考书。

教材吸收了近年来发展起来的新技术和新方法。本教材以基因克隆为主线，全书分为六章。第一章为核酸的分离纯化技术，包括从细菌、动物组织、植物组织等提取基因组DNA、以及质粒DNA、mRNA分离提取,以及核酸的纯化、浓度的测定及质量鉴定技术。第二章为电泳技术，包括琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。第三章是DNA扩增和cDNA文库的构建技术，包括PCR技术和分析技术、RT-PCR技术、cDNA文库的构建等实验。第四章为重组质粒的连接、转化技术，包括限制性内切酶的酶切反应、外源DNA和质粒载体的连接反应、大肠杆菌感受态细胞的制备、重组质粒的转化与选择等实验。第五章为重组体的鉴定、基因表达与分析技术，包括原位杂交、Southern杂交分析、Northern杂交分析等。第六章为工程菌的培养与目的产物分离鉴定技术，亦是综合性应用基因工程实验技术的系统实验。