转染实验技术

第1章 转染实验技术概述1.1 转染实验技术简介1.1.1 转染实验技术的概念1.1.2 外源基因转染真核细胞的目的、意义1.2 转染实验技术的分类及原理1.2.1 病毒感染法1.2.2 非病毒感染法1.3 转染实验技术的应用1.4 新材料与新技术在转染实验技术中的应用参考文献第2章 目的基因的获取2.1 目的基因概述2.2 化学合成法获取目的基因2.2.1 磷酸二酯法2.2.2 磷酸三酯法2.2.3 亚磷酸三酯法2.2.4 寡核苷酸连接法2.3 基因组文库钓取目的基因2.4 cDNA文库钓取目的基因2.4.1 mRNA的分离纯化（过程）2.4.2 双链cDNA的体外合成2.5 PCR获取目的基因2.5.1 PCR扩增DNA的基本原理2.5.2 PCR扩增产物的克隆2.5.3 PCR技术在目的基因制备中的应用2.6 RT?PCR法获取目的基因参考文献第3章 基因表达载体的选择3.1 基因表达载体概述3.2 基因表达载体分类3.3 基因表达载体的遗传标记3.4 常用原核基因表达质粒载体3.5 常用真核基因表达质粒载体3.6 病毒型表达载体3.6.1 噬菌体载体3.6.2 反转录病毒载体3.6.3 腺病毒载体3.7 可表达融合蛋白的载体3.7.1 谷光甘肽S?转移酶（GST）融合蛋白载体3.7.2 pMALTM融合蛋白表达载体3.8 基因表达载体的改造3.8.1 报道基因的改造3.8.2 启动子的研究3.8.3 大容量载体参考文献第4章 重组子的构建与鉴定4.1 限制性内切酶4.2 黏断连接方法及重点技术4.2.1 单酶切位点的连接4.2.2 双酶切位点的连接4.2.3 同工异源酶及同尾酶酶切位点的连接4.3 平端连接方法及重点技术4.4 酶切位点的改造和连接4.4.1 黏断切口转化为平端切口的连接4.4.2 人工接头的设计及人工黏断切口的制备4.4.3 酶切位点的化学修饰4.5 重组子的筛选与鉴定4.5.1 表型水平筛选4.5.2 分子水平鉴定参考文献第5章 化学转染方法将重组体导入真核细胞5.1 磷酸钙共沉淀法5.1.1 磷酸钙共沉淀法原理5.1.2 转染试剂、材料5.1.3 仪器设备5.1.4 操作步骤5.1.5 注意事项及影响因素5.2 DEAE?葡聚糖法转染5.2.1 DEAE?葡聚糖法转染原理5.2.2 转染试剂5.2.3 仪器设备5.2.4 操作步骤5.2.5 操作注意事项5.3 脂质体介导的转染5.3.1 脂质体介导的转染原理5.3.2 转染试剂5.3.3 仪器设备5.3.4 操作步骤5.3.5 操作注意事项5.4 纳米材料介导的转染5.4.1 纳米材料介导的转染原理5.4.2 转染试剂5.4.3 仪器设备5.4.4 操作步骤5.4.5 操作注意事项参考文献第6章 物理转染方法将重组体导入真核细胞6.1 显微注射法转染6.1.1 显微注射法原理6.1.2 转染试剂6.1.3 仪器设备6.1.4 操作步骤6.1.5 操作注意事项6.2 电穿孔法转染6.2.1 电穿孔法转染原理6.2.2 转染试剂6.2.3 仪器设备6.2.4 操作步骤6.2.5 操作注意事项6.3 基因枪转染6.3.1 基因枪技术的发展历史6.3.2 基因枪介导的转染原理和设备6.3.3 转染试剂：微弹载体、DNA微载体6.3.4 操作步骤6.3.5 操作注意事项6.3.6 基因枪技术作为新兴的转移基因的优点6.3.7 基因枪的发展趋势参考文献第7章 病毒转染方法将重组体导入真核细胞7.1 病毒转染系统概述7.2 包装细胞概述7.3 高浓度病毒原液的收集及滴度测定方法7.3.1 高浓度病毒原液收集7.3.2 病毒滴度测定方法7.4 病毒转染的辅助系统7.4.1 转染试剂7.4.2 细胞状态7.4.3 转染方法7.4.4 载体构建7.5 腺病毒介导的转染7.5.1 腺病毒介导的转染原理7.5.2 转染试剂7.5.3 仪器设备7.5.4 操作步骤7.5.5 操作注意事项7.6 反转录病毒介导的转染7.6.1 反转录病毒介导的转染原理7.6.2 转染试剂7.6.3 仪器设备7.6.4 操作步骤7.6.5 操作注意事项参考文献第8章 转染成功细胞的选择8.1 遗传报道基因系统8.1.1 报道基因系统概述8.1.2 报道基因的分类及使用选择8.1.3 报道基因技术的前景展望8.1.4 常见的报道基因8.2 报道基因的同位素分析法8.2.1 放射性同位素的基本性质8.2.2 射线的防护8.3 报道基因的非同位素分析法8.3.1 酶联免疫法（ELISA）8.3.2 荧光法8.3.3 免疫组织化学染色法参考文献第9章 转染技术的应用9.1 转基因动物及基因敲除动物9.1.1 转基因动物的定义9.1.2 制备转基因动物的方法9.1.3 基因敲除动物9.2 转基因植物9.2.1 转基因植物的定义9.2.2 常用的植物转基因方法9.2.3 转基因植物的主要应用方向9.3 基因制药9.3.1 基因制药概述9.3.2 基因工程药物生产的基本过程9.3.3 基因制药技术的主要应用9.4 基因治疗9.4.1 遗传性疾病的基因治疗9.4.2 肿瘤基因治疗9.4.3 其他疾病的基因治疗9.5 RNA干扰治疗9.5.1 在骨病治疗中的应用9.5.2 在神经系统疾病中的应用9.5.3 在肿瘤治疗中的应用9.5.4 在抗病毒治疗中的应用9.5.5 在皮肤病治疗中的应用参考文献

　　本书覆盖了转染前目的基因的获取、载体的选择，多种转染技术，转染技术的应用等。作为一本实验技术类书籍，本书不仅较详细地阐述了有关技术的具体操作和程序，更着力于对各种技术的基本原理及其相关理论基础进行深层次的剖析。本书不仅可作为从事生命科学，特别是分子生物学相关领域工作者的实验室必备参考工具书，同：时也可供高校相关专业师生及科学工作者对转染实验技术的理论做深入探讨时参考。