植物细胞与组织研究方法

第一篇 植物细胞与组织制片原理

1 植物制片的目的和方法

1.1 植物制片简介

1.1.1 植物制片目的

1.1.2 植物制片方法

1.2 植物制片常用仪器、用具、药品

1.3 植物制片一般流程

1.3.1 一般制片

1.3.2 石蜡/半薄切片

1.4 植物制片相关常用技术

1.4.1 清洁技术

1.4.2 封边与封片（藏）技术

1.4.3 切片刀的磨刀技术

2 植物制片的原理

2.1 选材

2.1.1 材料的选择

2.1.2 材料的切取

2.2 杀死、固定与保存

2.2.1 杀死、固定与保存

2.2.2 固定的基本原理

2.2.3 常用的固定剂

2.2.4 固定操作注意事项

2.3 洗涤

2.3.1 洗涤的作用

2.3.2 洗涤的方法

2.4 脱水剂与脱水

2.4.1 脱水

2.4.2 常用的脱水剂

2.5 透明剂与透明

2.5.1 透明的作用

2.5.2 常用的透明剂

2.6 制片

2.7 染色剂与染色

2.7.1 染色的发现与染色原理

2.7.2 染色剂的概念与性质

2.7.3 染色剂的种类

2.8 封固与封固剂

2.8.1 水溶性封固剂

2.8.2 糖浆封固剂

2.8.3 树脂性封固剂

2.8.4 其它封固剂

3 常用染色剂及染色方法

3.1 常用染色剂

3.1.1 苏木精（Haematoxylin）

3.1.2 洋红（Carmine）

3.1.3 番红O（Safranin Y或afranin A）

3.1.4 亮绿（Light Green）

3.1.5 固绿（Fast green）

3.1.6 孔雀绿（Malachite Green）

3.1.7 甲基绿（Methyl Green）

3.1.8 碘绿（Iodine Green）

3.1.9 结晶紫（Crystal Violet）

3.1.10 橘红G（Orange G）

3.1.11 曙红（Eosin）

3.1.12 真曙红（Erythrosin）

3.1.13 中性红（Neutral red）

3.1.14 酸性品红（复红）（Acid fuchsin）

3.1.15 碱性品红（复红）（Basic Fuchsin）

3.1.16 刚果红（Congo Red）

3.1.17 甲苯胺蓝（Toluidine blue）

3.1.18 甲基蓝（Methyl blue）

3.1.19 亚甲基蓝（Methylene Blue trihydrate）

3.1.20 苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）

3.1.21 苏丹Ⅳ（Sudan Ⅳ）

3.1.22 苯胺蓝（Cotton Blue）

3.1.23 地衣红（Orcein）

3.1.24 天青石兰（Celestine Blue）

3.1.25 苦味酸（Picric Acid）

3.1.26 俾斯麦棕（Basic Brown）

3.1.27 玫瑰红（Rhodamine）

3.1.28 詹纳斯绿（Janus Green）

3.1.29 红四氮唑（2，3，5Triphenyltetrazolium chloride）

3.1.30 间苯三酚（Phloroglucinol dihydrate）

3.2 染色方法

3.2.1 染色方法的种类

3.2.2 常用的染色方法与步骤

3.3 染色中必须注意的几个问题

3.3.1 染色液浓度

3.3.2 染色温度与时间

3.3.3 固定液对于染色的影响

3.3.4 染色时应注意的几个问题

第二篇 植物细胞与组织制片方法

4 石蜡切片法

4.1 取材、固定、保存、洗涤

4.1.1 取材

4.1.2 固定

4.1.3 冲洗

4.2 脱水、透明

4.2.1 脱水

4.2.2 透明

4.3 浸蜡

4.4 包埋

4.4.1 包埋方法

4.4.2 包埋石蜡选择

4.5 修块、切片

4.5.1 修块、粘固

4.5.2 组织切片机的结构及操作步骤

4.5.3 切片注意事项

4.6 粘片、展片、烤片（烘片）

4.7 脱蜡、复水、染色、脱水、透明

4.8 封片

5 半薄切片技术

5.1 水溶性树脂包埋

5.1.1 GMA包埋法

5.1.2 Quetol 523包埋

5.1.3 JB-4包埋

5.1.4 Lowicryl K4M包埋法

5.2 环氧树脂包埋法

5.2.1 环氧树脂包埋的机制和配方

5.2.2 材料洗涤、脱水

5.2.3 渗透与聚合

5.3 修块和切片

5.3.1 修块

5.3.2 切片刀

5.3.3 切片注意事项

5.4 染色

6 非切片制片

6.1 暂时封藏

6.1.1 简易观察制片

6.1.2 孢子及花粉粒萌发观察制片

6.2 整体制片

6.2.1 甘油法

6.2.2 甘油冻胶法

6.2.3 甘油二甲苯法

6.2.4 糖浆法

6.2.5 水封藏法

6.2.6 松节油法

6.3 涂压制片

6.3.1 涂压法的基本步骤

6.3.2 植物花粉母细胞的涂片法

6.3.3 植物根尖、茎端的压片法

6.4 离析制片

6.4.1 硝酸氯化钾离析法（Schaltze法）

6.4.2 铬酸硝酸离析法（Teffrey法）

6.4.3 乙酸过氧化氢离析法

6.4.4 煮沸法

6.4.5 盐酸草酸离析法

6.4.6 氨水离析法

6.4.7 氢氧化钠离析法

6.4.8 乙醇盐酸离析法

6.4.9 次氯酸钠法

6.5 透明制片

6.5.1 乳酸苯酚透明法

6.5.2 氢氧化钠透明法

6.5.3 冬青油透明法

6.5.4 甘油透明法

7 植物细胞与组织显微测定

7.1 碳水化合物显微测定

7.1.1 高碘酸希夫反应——显示多糖（淀粉粒及细胞壁纤维素等）

7.1.2 碘碘化钾反应——显示淀粉粒

7.1.3 氯化铁羟胺反应——显示果胶

7.1.4 氯碘化锌反应——显示纤维素

7.1.5 氯代亚硫酸盐法——显示木质素

7.1.6 苯胺蓝荧光法——显示胼胝质

7.1.7 亚硫酸铁反应——显示单宁

7.1.8 银还原法——显示维生素C

7.2 脂类显微测定

7.2.1 苏丹染料染色法——显示全部脂类

7.2.2 Nile蓝法——显示中性脂肪及酸性类脂

7.2.3 锇酸染色法——显示中性不饱和脂类

7.2.4 酸性氧化苏木精法——显示磷脂

7.2.5 过甲酸希夫法——显示不饱和键脂类

7.2.6 丙二醇苏丹法——显示类脂

7.3 蛋白质的显微测定

7.3.1 汞溴酚蓝法——显示总蛋白质

7.3.2 茚三酮（或四氧嘧啶）希夫反应——显示总蛋白质

7.3.3 氯胺T希夫试剂反应——显示总蛋白

7.3.4 固绿染色法——显示总蛋白质或碱性蛋白

7.3.5 偶联四唑反应——显示含色氨酸、组氨酸和酪氨酸的蛋白质

7.3.6 重氮化偶联反应——显示含酪氨酸蛋白质

7.3.7 Sakagushi反应——显示含精氨酸蛋白质

7.3.8 对二甲氨基苯甲醛反应——显示含色氨酸蛋白质

7.3.9 铁氰化铁法——显示蛋白质—SH基

7.3.10 汞橙（RSR）法——显示蛋白质—SH基

7.3.11 巯基乙酸铁氰化铁法——显示蛋白质—SS基

7.3.12 过甲酸希夫试剂反应——显示—SS基蛋白质

7.3.13 过甲酸Alcian蓝法

7.4 核酸的显微测定

7.4.1 孚尔根反应——显示DNA

7.4.2 甲基绿派洛宁（焦宁）染色法——显示DNA与RNA

7.4.3 苏木精色法

7.4.4 铁矾苏木精染色

7.5 酶的显微测定

7.5.1 联苯胺反应——显示过氧化物酶

7.5.2 氯化三苯四氮唑（TTC）法——显示脱氧酶

7.5.3 四氮唑盐反应——显示琥珀酸脱氢酶

7.5.4 Nadi反应——显示细胞色素氯化酶

7.5.5 铅沉淀法——显示酸性磷酸酶

7.5.6 钙钴沉淀法——显示碱性磷酸酶

7.5.7 铅沉淀法

7.5.8 钙皂沉淀法——显示酯酶

7.5.9 靛蓝法——显示酯酶

7.5.10 邻苯二酚法——显示多酚氧化酶

7.6 细胞壁成分显微测定

7.6.1 纤维素测定

7.6.2 木质素测定

7.6.3 角质、栓质测定

7.6.4 果胶质测定

7.7 活体染色

7.7.1 线粒体活体染色

7.7.2 液泡活体染色

8 其它切片技术

8.1 徒手切片

8.1.1 徒手切片法的应用及优缺点

8.1.2 徒手切片操作过程

8.1.3 过程小结

8.2 滑走切片

8.2.1 滑走切片方法和步骤

8.2.2 材料的软化处理方法

8.3 蒸汽切片

8.4 冰冻切片

8.4.1 冰冻的原理

8.4.2 利用专用冰冻切片机和干冰进行切片

8.4.3 切片过程

8.4.4 半导体式冷冻切片机

8.4.5 恒冷箱式冷冻切片机

8.5 木材切片

8.5.1 直接切片

8.5.2 包埋切片

第三篇 显微镜与显微技术

9 显微镜简介

9.1 显微镜分类

9.2 显微镜基本原理

9.2.1 透镜成像的基本知识

9.2.2 显微镜光学系统成像

9.3 显微镜光学技术参数

9.3.1 透镜分辨率

9.3.2 分辨极限与放大率

9.3.3 景深

9.3.4 焦距和角孔径

9.3.5 色差

9.3.6 齐焦距

9.3.7 同轴度

9.3.8 覆盖差

9.3.9 工作距离

9.3.10 镜像亮度

10 常用显微镜

10.1 正置显微镜

10.1.1 机械部分

10.1.2 光学部分

10.1.3 照明系统

10.1.4 显微镜维护与保养

10.2 倒置显微镜

10.2.1 倒置显微镜简介

10.2.2 OlympusXI 71倒置显微镜

10.2.3 透射光明场观察步骤

10.2.4 相衬观察（使用IX2ILL100照明柱）

10.2.5 微分干涉衬（DIC）观察（使用IX2-ILL100照明柱）

10.2.6 简易偏光观察（使用IX2-ILL100照明柱）

10.3 体视显微镜的原理、结构与使用

10.3.1 体视镜光路

10.3.2 普通变焦体视镜

10.3.3 Olympus SZX16型解剖镜

10.4 荧光显微镜

10.4.1 荧光原理

10.4.2 荧光显微镜原理

10.4.3 荧光显微镜结构

10.4.4 荧光显微镜使用

11 显微图像捕获及处理

11.1 显微图像捕获

11.1.1 显微图像捕获

11.1.2 Olympus DP71图像捕获系统

11.2 图像处理

11.2.1 图像数字化

11.2.2 位图的有关术语

11.3 Image-Pro Plus图像处理软件

11.3.1 Image-Pro Plus窗口

11.3.2 Image-Pro Plus操作

附录

参考文献

植物细胞与组织研究方法是生物类、大农学类的大学生、研究生的一门重要课程，也是一门重要的实验技术。《植物细胞与组织研究方法》根据编者多年的教学、科研积累以及实验技能整理而成。《植物细胞与组织研究方法》主要介绍植物细胞与组织研究中广泛应用和实用的内容和方法，包括植物制片技术（如石蜡切片、半薄切片、木材切片、徒手切片、印痕技术、离析技术、涂压技术等）、植物组织与细胞化学、各种显微技术（如正置显微技术、倒置显微技术、荧光显微技术、体视显微技术、显微操作技术等）、图像采集、图像处理、全书图文并茂，既系统地介绍了当今植物细胞与组织的研究方法，又突出了实验技术要点。