基因工程及其分子生物学基础

1　基因工程的四大要素及实施要点 1.1 基因工程操作中常用的工具酶 1.2　基因的分离 1.3　基因工程载体 1.4　受体细胞和重组基因的导入 1.5　基因重组的方法 1.6　基因重组体的筛选2　外源基因在宿主细胞中的高效表达 2.1　有效的转录起始与基因的高效表达 2.2 mRNA的有效延伸和转录终止与基因的高效表达 2.3 mRNA的稳定性与基因的高效表达 2.4　有效的翻译起始与基因的高效表达 2.5　遗传密码应用的偏倚性与基因的高效表达 2.6 mRNA的二级结构与基因的高效表达 2.7 RNA的加工与基因的高效表达

1　基因工程的四大要素及实施要点 1.1 基因工程操作中常用的工具酶 1.2　基因的分离 1.3　基因工程载体 1.4　受体细胞和重组基因的导入 1.5　基因重组的方法 1.6　基因重组体的筛选2　外源基因在宿主细胞中的高效表达 2.1　有效的转录起始与基因的高效表达 2.2 mRNA的有效延伸和转录终止与基因的高效表达 2.3 mRNA的稳定性与基因的高效表达 2.4　有效的翻译起始与基因的高效表达 2.5　遗传密码应用的偏倚性与基因的高效表达 2.6 mRNA的二级结构与基因的高效表达 2.7 RNA的加工与基因的高效表达 2.8 mRNA序列上终止密码的选择 2.9　表达质粒（或载体）的拷贝数及稳定性与基因的高效表达 2.10　外源蛋白的稳定性与基因的高效表达3　基因的融合和融合蛋白的表达 3.1 利用基因融合技术表达外源基因的缘由 3.2　基因融合的策略 3.3　基因融合和重组蛋白的产生 3.4　基因融合和展示筛选 3.5　基因融合和蛋白分泌 3.6　融合蛋白的纯化 3.7　融合蛋白的位点特异性切割 附录　重组蛋白表达和纯化中常用的融合标签4　外源基因的分泌表达 4.1　外源基因在E.coli细胞中的分泌表达 4.2　外源基因在枯草杆菌中的分泌表达 4.3　a-因子前导序列介导的酵母细胞分泌系统 4.4　外源基因在哺乳动物细胞中的分泌表达5　重组蛋白的正确折叠及修饰 5.1　重组蛋白的可溶性表达和折叠 5.2　重组蛋白的重折叠 5.3　外源蛋白在翻译后的修饰6　几种真核细胞表达系统 6.1　哺乳动物细胞表达系统 6.2　外源基因在哺乳动物细胞中的组成性表达和诱导性表达 6.3　核型多角体病毒为载体的昆虫（细胞）表达系统 6.4　转基因动物及其应用 6.5　转基因植物及其应用 6.6　DNA疫苗7　分子杂交技术 7.1　探针与目标核酸相互作用的原理 7.2　探针的选择和特异性 7.3　杂交的速率与探针长度、浓度及杂交加速剂的关系 7.4　杂交的最适条件 7.5　放射性探针的制备 7.6　非放射性探针的制备 7.7　放射性和非放射性标记探针的应用范围 7.8　DNA微阵列——基因组芯片8　粒子轰击和基因转移 8.1　粒子轰击技术简介 8.2　粒子轰击技术的应用范围9　聚合酶链反应及其应用 9.1　聚合酶链反应的原理 9.2　标准的PCR扩增方案 9.3 PCR引物及其设计 9.4　关于热稳定的DNA聚合酶 9.5 PCR对模板质量的要求 9.6 PCR反应缓冲液和循环（周期）数 9.7 PCR相关技术的原理及其应用10　各种生物学展示技术　10.1　噬菌体展示技术　10.2　细菌展示技术　10.3　酵母展示技术　10.4　核糖体展示技术　10.5　mRNA展示技术11　基因打靶技术及其应用　11.1 同源重组与基因打靶　11.2　组织特异性的基因打靶　11.3　转座子介导的基因打靶　11.4　RNA干涉与基因敲除……12　DNA序列分析13　基因突变14　寡核苷酸的化学合成15　蛋白质相互作用及其分析方法16　蛋白质-核酸相互作用17　蛋白质工程概述参考文献