肾脏病学实验技术操作规程

第1章 细胞学实验技术

第一节 细胞培养

一、细胞复苏与冻存

二、原代近曲肾小管上皮细胞的分离培养

三、原代肾小球内皮细胞的分离培养

四、原代肾小球系膜细胞的分离培养

五、原代肾问质成纤维细胞的分离培养

六、足细胞培养

七、细胞共培养

八、成体干细胞培养技术（大鼠骨髓间充质干细胞）

九、细胞脂质体转染

十、肾脏细胞电转方法

十一、细胞原位杂交

第二节 流式细胞仪技术

一、普通细胞分选

二、细胞无菌分选

三、流式细胞仪检测细?大小

四、流式细胞仪检测细胞周期

五、流式细胞仪检测细胞凋亡

第三节 共聚焦技术Ⅰ——细胞内蛋白质定位、细胞器及自噬体等亚细胞结构检测

一、共聚焦显微镜常规检测方法

二、细胞免疫荧光染色方法

三、细胞免疫荧光多重染色

四、细胞内脂肪颗粒染色及检测

五、细胞骨架蛋白染色及检?

六、细胞内质网染色及检测

七、细胞内线粒体染色及检测

八、细胞内溶酶体染色及检测

九、细胞内自噬体染色及检测

第四节 共聚焦技术Ⅱ——活体细胞内离子及功能的实时动态监测

一、活体细胞内离子动态检测常规方法

二、细胞胞浆及线粒体Ca2+的染色及检测

三、细胞内Na+染色及检测

四、细胞内pH染色及检测

五、细胞线粒体膜电位的染色及检测

六、细胞内活性氧（ROS）染色及检测

七、细胞内钙离子震荡及钙火花检测

八、荧光光漂白恢复（FRAP）技术检测细胞间通讯

九、荧光漂白丢失（FLIP）检测细胞膜蛋白的流动性及蛋白质核转位

十、荧光共振能量转移（FRET）检测蛋白质相互关系

十一、细胞X-Z纵切扫描检测极性细胞蛋白定位

十二、细胞及组织切片三维重建

第五节 共聚焦技术Ⅲ——荧光染料/探针标记样本存在的问题及分析对策

一、荧光标记样品需要注意的问题

二、荧光标记实验经常出现的问题及对策

三、典型举例

第六节 细胞实验其他技术

一、MTT测定细胞活力

二、细胞增殖测定（BrdU技术）

三、肾脏细胞微分离技术

四、亚细胞组分分离技术

第2章 分子生物学实验技术

第一节 核酸的提取与纯化

一、DNA的提取与纯化

……

第3章 病理学技术

第4章 转基因技术

第5章 肾脏疾病动物模型

第6章 电生理技术

第7章 留取尿液方法

第8章 肾脏病生物样本资源库的建设规范

附录A 各实验室岗前培训内容

附录B 各实验室工作制度

《肾脏病学实验技术操作规程》全面、系统地介绍了肾脏病学研究领域中涉及的实验技术，旨在为肾脏病专业的同仁提供一个简明、全面、高效的实验技术流程。全书分8章，第1章重点介绍了肾脏各种固有细胞的分离及培养方法，包括常用的商品化细胞系。介绍了常用的基因转染方法以及激光共聚焦检测和流式细胞仪的最新应用。第2章主要介绍了常用的分子生物学技术，专门分析了常见的实验失败原因并提出对策。第3章主要介绍了常用的肾脏常规病理、免疫病理、分子病理及电镜技术。第4章简要介绍了转基因及基因敲除动物模型的制备。第5章介绍了常用的肾脏疾病动物模型以及高难度大鼠肾脏发育、肾移植模型等的建立。第6章简单介绍了电生理技术。第7章为尿液留取方法。第8章详尽阐述了生物资源库的标本留取、保存等过程，为开展流行病学调查和大规模临床试验提供研究平台。附录对实验室的常规制度进行了简述。所有的技术都设置了规范化的操作流程、注意事项，并相应地列举了本重点实验室应用这些技术进行的研究示例。对于实验中常见的疑点、难点、热点问题进行了剖析。《肾脏病学实验技术操作规程》内容丰富、实用性强，适合于肾脏病学及其他医学领域中从事科研的医生、学生或技师参阅。《肾脏病学实验技术操作规程》由陈香美担任主编。