酵母遗传学方法实验指南

译者序

原著序

前言

遗传学命名法

实验篇

实验一酵母细胞的观察

实验二营养缺陷型、温度敏感型和渗透压敏感型突变株的分离和鉴别

实验三减数分裂作图

实验四有丝分裂重组和随机孢子分析

实验五酵母转化

实验六合成致死突变体

实验七基因置换

实验八ras2抑制基因的分离

实验九细胞型操作

实验十用插入诱变法分离突变体

实验十一利用双杂交差异互作筛选以分离功能突变体

技术和方案篇

技术和方案1酵母的高效转化

技术和方案2快速粗放的酵母菌落质粒转化法

技术和方案3酵母DNA分离

技术和方案4酵母蛋白质的抽提

技术和方案5TAP纯化方法

技术和方案6酵母RNA的分离

技术和方案7质粒DNA的羟胺突变

技术和方案8酵母β-半乳糖苷酶的测定

技术和方案9羧肽酶Y的平板鉴定

技术和方案10随机孢子分析

技术和方案11酵母活细胞染色

技术和方案12酵母免疫荧光法

技术和方案13已固定细胞的肌动蛋白染色

技术和方案14PCR介导基因破坏法

技术和方案15酵母菌落PCR

技术和方案16分光光度法测酵母细胞密度

技术和方案17细胞同步化

技术和方案18染色质免疫沉淀

技术和方案19酵母DNA流式细胞记数

技术和方案20对数生长

技术和方案21EMS诱变

技术和方案22四分体解剖

技术和方案23制备四分体解剖针

技术和方案24挑取合子

技术和方案25测定铺板效率

技术和方案26小量提取E.coliDNA

技术和方案27E.coli感受态的制备与转化

技术和方案28系统缺失菌株的保存及操作

附录A培养基

附录B菌株保存

附录C酵母遗传图谱和物理图谱

附录D平板划线模板

附录E菌株核型分析电泳的Southern印迹作图

附录F菌株

附录G用标准血球计数板进行酵母细胞计数

附录H四分孢子计分表

　　美国冷泉港实验室被称为世界生命科学的圣地与分子生物学的摇篮，为全球影响最大的十大研究机构之一。《酵母遗传学方法实验指南》就是冷泉港实验室组织该领域知名学者合编的一本培训教程，迄今已有47年的历史，其间已更新再版多次，以及时适应这个领域的最新进展。本教程最大的特点在于其权威性、全面性和可操作性，它将酵母经典遗传学和分子生物学实验的基本原理与操作方法都做了详尽的介绍。因此，无论对于专业科研人员还是初学者，都是一本不可多得的必备参考书。　　本书作为冷泉港实验室出版社的经典酵母实验教程的第二版，收录了酵母研究中最常用的减数分裂作图、转化、基因置换等11个实验，以及酵母蛋白抽提、活体染色、RNA分离等28种技术方法。文字简洁明了，内容全面而详细，兼顾经典和前沿，是该领域的权威之作。　　适合于大学院校、科研单位的教师、学生及研究人员作为实验指导书，亦可供从事酵母相关生物制品行业的科技人员参考。