病毒与免疫学实验教程

总序前言

第一部分 病毒学实验

第一章 病毒的提纯及浓度测定 ·3 实验一 植物病毒的提纯 3 实验二 紫外分光光度法测定提纯病毒的浓度 · 11实验三 动物病毒的提纯和感染单位测定15 第二章 病毒的形态学观察·20 实验四 负染法观察提纯的病毒 23 实验五 免疫电镜法检测发病叶片中的病毒24 实验六 超薄切片法观察组织中的病毒及细胞病理学变化26 实验七 免疫胶体金检测细胞中病毒的分布28 第三章 RNA病毒侵染性 cDNA克隆的构建33 实验八 烟草花叶病毒侵染性 cDNA克隆的构建33 实验九 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性 cDNA克隆的构建 ·42 实验十 单引物扩增技术获得病毒基因组全序列 49 第四章 病毒的分子生物学检测技术 57 实验十一 RT-PCR检测植物叶片中的特定病毒62 实验十二 病毒的斑点杂交检测 67 实验十三 病毒的 Northern blotting检测技术 71 实验十四 病毒的实时荧光定量 PCR检测 ·75 实验十五 反转录环介导的等温扩增技术检测病毒 86 第五章 病毒的血清学检测技术 94 实验十六 植物病毒抗血清效价的测定·96 实验十七 琼脂双扩散反应检测植物病毒98

第二部分 免疫学实验

第六章 实验动物 103 实验动物简介 103

实验十八 实验动物采血方法 114 实验十九 实验动物免疫方法 116 实验二十 常用免疫学实验动物模型的建立 120 第七章 细胞培养技术·133 实验二十一 细胞的传代与细胞计数136 实验二十二 细胞的冻存与复苏 ·139 实验二十三 树突细胞的诱导及培养142 第八章 抗体制备及检测技术 ·144 实验二十四 兔抗血清制备 144 实验二十五 单克隆抗体的制备 ·146 实验二十六 抗体的纯化 ·153 实验二十七 血凝和血凝抑制实验·154 实验二十八 酶联免疫吸附实验 ·156 实验二十九 免疫电泳实验 159 实验三十 蛋白免疫印迹实验 162 实验三十一 免疫组织化学实验 ·164 实验三十二 细胞免疫荧光实验 ·167 第九章 补体实验170 实验三十三 补体与补体单位的滴定实验 ·170 实验三十四 溶血素制备与补体参与的溶血反应 ·172 实验三十五 补体介导的细胞毒实验175 第十章 淋巴细胞分离纯化 177 实验三十六 制备免疫细胞悬液 ·177 实验三十七 密度梯度离心法分离外周血液中的白细胞181 实验三十八 脾脏不同免疫细胞磁珠分选实验 183 第十一章 免疫细胞荧光染色流式细胞仪检测·188 实验三十九 免疫细胞表面分子检测188 实验四十 胞内细胞因子表达检测·192 实验四十一 Annexin V/PI双荧光染色检测细胞凋亡 194 第十二章 免疫细胞功能实验 ·197 实验四十二 淋巴细胞转化实验 ·197 实验四十三 混合淋巴细胞反应 ·199 实验四十四 T细胞增殖实验——MTT法 201 实验四十五 T细胞增殖实验——3H-TdR掺入法 204 实验四十六 T细胞增殖实验——CFSE染色法 206 实验四十七 体外 CTL实验208 实验四十八 体内 CTL实验 211 实验四十九 酶联免疫斑点实验 ·214 实验五十 B细胞增殖实验 216 实验五十一 B细胞溶血空斑实验·218 实验五十二 NK细胞杀伤活性实验——乳酸脱氢酶释放法·220 实验五十三 NK细胞杀伤活性检测——MTT比色法 222 实验五十四 NK细胞杀伤活性实验——51Cr释放法·223 附录一 常用血液抗凝剂的配制及用法 226 附录二 常用消毒液的配制及用途 228 附录三 常用试剂和溶液的配制 229

病毒与免疫学实验教程由中国农业大学、北京大学、河南大学、四川农业大学和中国医学科学院的教师共同编写完成。病毒与免疫学实验教程汇集了各位参编教师多年一线教学和科研积累的素材，并根据当前教学和科研的实际需要编写而成。病毒学部分重点介绍了病毒学实验技术的基本原理、方法、操作步骤及结果分析，内容包括病毒的培养、提纯，形态学观察及血清学、分子水平的检测方法，共17 个实验；免疫学实验结合了编者多年的研究经验及当前免疫学最新进展，介绍了实验动物、免疫细胞培养、抗体制备、补体实验及淋巴细胞纯化及功能检测方法，共37 个实验。