分子生物学与基因工程实验教程

第1部分 基因工程实验

实验1 重组质粒pcDNA3.0-ARRB的提取，质量检测及酶切分析

1.1 质粒提取

1.2 质粒质量检测

1.3 质粒酶切

1.4 琼脂糖凝胶电泳检测

实验2 用琼脂糖凝胶电泳进行目的DNA片段的回收及质量检测

1.1 用琼脂糖凝胶电泳进行目的DNA片段的分离

1.2 从凝胶中回收目的DNA片段

1.3 DNA片段浓度及纯度检测

实验3 目的DNA片段与载体连接，感受态制备及连接产物的转化

1.1 连接反应

1.2 感受态制备

1.3 连接产物转化感受态细菌

实验4 PCR鉴定细菌克隆

1.1 PCR鉴定克隆

1.2 琼脂糖凝胶电泳

实验5 SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色分析目的蛋白的表达

1.1 电泳胶的制备

1.2 蛋白样品制备及SDS-PAGE电泳

1.3 转膜

1.4 考马斯亮蓝染色

实验6 Westernblot分析目的蛋白的表达

1.1 SDS-PAGE电泳

1.2 转膜

1.3 封闭

1.4 一抗孵育

1.5 二抗孵育

1.6 显色

第2部分 分子生物学实验

实验7 大肠杆菌基因组DNA的提取与定量

实验8 大肠杆菌生物素连接酶基因的RCR扩增及扩增产物的鉴定

实验9 小鼠肝组织中总RNA的提取

实验10 逆转录·聚合酶链反应（RT-PCR）

附录材料

《高等院校生命科学与技术实验教材：分子生物学与基因工程实验教程》由两大部分十大实验组成，包括质粒提取、核酸回收、载体连接、PCR进行克隆鉴定、SDS-PAGE以及Westernblot等。在系统进行一个基因克隆的同时让学生全面掌握质粒、限制性内切酶、连接酶、感受态、转化PCR、重组蛋白表达及鉴定等基本操作；从而使学生巩固基因工程学理论知识，并为将来进一步学习打下技术基础。