动物生物化学实验指导

前言

第一部分 生物化学实验分析的基本技术

第一章 离心技术

1.1 离心技术的基本原理

1.2 影响离心沉降速率的因素

1.3 沉降系数

1.4 离心机

1.5 离心技术的应用

第二章 层析技术

2.1 层析的基本理论

2.2层析的基本概念

2.3 层析法的分类

2.4 几种常用的层析方法

第三章 分光光度技术

3.1 分光光度技术的基本原理

3.2 朗伯-比耳定律

3.3 分光光度计的结构

3.4 常用的分光光度计及其使用

第四章 电泳技术

4.1 电泳技术的基本原理

4.2 常用的电泳支持介质

4.3 常见的电泳类型

4.4 电泳相关技术

第二部分 基础实验

实验一 血液样品的处理与组织匀浆的制备

实验二 茚三酮显色法测定氨基酸含量

实验三 血清蛋白质含量的测定

3.1 考马斯亮蓝染料结合法

3.2 Folin-酚法

3.3 紫外分光光度法

实验四 SDS-PAGE测定蛋白质分子质量

实验五 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

实验六 凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点

实验七 阳离子交换树脂纯化细胞色素c

实验八 亲和层析法纯化胰蛋白酶

实验九 唾液淀粉酶活性影响因素的观察

实验十 血清谷丙转氨酶活性的测定

实验十一 乳酸脱氢酶同工酶分析

实验十二 琥珀酸脱氢酶竞争性抑制观察

实验十三 血液葡萄糖含量的测定

13.1 福林-吴宪氏法

13.2 邻甲苯胺法

13.3 葡萄糖氧化酶法

实验十四 血清总脂的测定——香草醛法

实验十五 血清总胆固醇的测定——邻苯二甲醛法

实验十六 维生素C含量的测定

实验十七 动物基因组DNA的制备和检测

17.1 动物基因组DNA的制备——苯酚法

17.2 DNA含量测定

17.3 琼脂糖凝胶电泳分离DNA

实验十八 质粒DNA的制备

实验十九 动物组织总RNA的提取

实验二十 cDNA的合成

实验二十一 聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增基因

第三部分 综合性实验

实验一 肝脏碱性磷酸酶的制备与活力测定

1.1 肝脏碱性磷酸酶的制备

1.2 碱性磷酸酶活力的测定

1.3 碱性磷酸酶比活力的测定

1.4 碱性磷酸酶Km的测定

1.5 磷酸盐对碱性磷酸酶的抑制作用观察

实验二 心肌细胞色素c的制备

2.1 心肌细胞色素c的提取

2.2 阳离子交换树脂纯化细胞色素c

2.3 心肌细胞色素c含量的测定

实验三 血清IgG的分离与制备

3.1 血清IgG的分离

3.2 凝胶过滤层析法脱盐

3.3 离子交换法纯化IgG

3.4 ELISA法测定IgG的活性

3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG的纯度

3.6 IgG比活力的测定

3.7 Western Blot法鉴定羊血清IgG

实验四 胰蛋白酶的制备及活力的测定

4.1 胰蛋白酶的制备

4.2 胰蛋白酶活力和比活力的测定

4.3 胰蛋白酶抑制剂——鸡卵黏蛋白的制备

4.4 胰蛋白酶结晶的制备

第四部分 附录

附录一 动物生物化学实验的基本要求

附录二 实验室安全及防护知识

附录三 实验用器皿的清洗及洗涤液的配制

附录四 实验室常用仪器的使用

附录五 国际相对原子质量表

附录六 试剂及试剂配制与保存

附录七 生物化学实验常用数据

附录八 实验误差与提高实验准确度的方法

附录九 研究、设计型实验的基本程序

附录十 实验设计的三要素和六原则

主要参考文献

《动物生物化学实验指导/西北农林科技大学动物科学实验教学示范中心系列实验教材》分为四部分，第一部分介绍了本科常用生物化学实验分析技术的基本原理和操作，旨在加深学生对生物化学实验技术基础理论的理解，掌握生物化学实验分析的基本方法和操作程序；第二部分结合生物化学理论教学，安排了21个基础验证性实验项目，旨在巩固生物化学理论知识，锻炼实验操作能力；第三部分设计了4个综合性实验，目的是让学生对实验的系统性有一定程度的理解；第四部分为附录，列举动物生物化学实验基本要求、常用试剂配制及一些技术数据等内容。