分子免疫学实验技术指南

第一部分常用免疫学技术

第一章蛋白质分析与纯化

第一节蛋白质浓度测定

一、Bradford法

二、Lowry法测蛋白质含量

三、紫外吸收法测蛋白质含量

第二节蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳

第三节Western印迹

第四节蛋白质纯化

第五节离子交换层析

第六节亲和层析

一、谷胱甘肽亲和层析

二、金属螯合亲和层析

三、ProteinA、ProteinG亲和层析

第七节疏水作用层析

参考文献

第二章抗体制备技术

第一节多克隆抗体的制备

双向免疫扩散法测定抗血清效价

第二节单克隆抗体的制备

一、动物免疫

二、细胞融合技术

三、杂交瘤细胞克隆化

四、单抗亚类测定

五、单克隆抗体的大量制备

参考文献

第三章抗体纯化和标记技术

第一节抗体的纯化

一、IgG的纯化

二、IgM的纯化

第二节抗体片段的制备

一、IgG片段的纯化

二、IgM片段的纯化

第三节放射性同位素标记抗体技术

一、氯胺T法

二、Iodogen法

第四节荧光素标记抗体技术

第五节酶标记抗体技术

第六节生物素标记抗体技术

第七节铕标记抗体技术

第八节胶体金标记抗体技术

参考文献

第四章免疫检测技术

第一节免疫荧光技术

间接细胞免疫荧光技术

第二节酶免疫技术

一、双抗体夹心法检测抗原

二、间接法测定抗体

三、竞争法

第三节放射免疫技术

一、放射免疫分析

二、免疫放射分析

第四节化学发光免疫分析技术

化学发光酶联免疫分析

参考文献

第五章免疫细胞分离技术

第一节密度梯度分离技术

第二节黏附分离技术

第三节磁珠分离技术

第四节流式细胞仪分离技术

参考文献

第六章细胞功能检测

第一节细胞增殖试验

第二节吞噬试验

第三节细胞黏附试验

第四节抗体依赖的细胞毒试验

第五节补体介导的细胞毒试验

第六节凋亡检测

一、细胞凋亡的形态学检测

二、磷脂酰丝氨酸外翻分析

三、线粒体膜势能的检测

四、DNA片段化检测

五、Caspases活性的检测

第七章免疫组织化学和免疫电镜

第一节免疫组织化学

第二节免疫电镜

参考文献

第八章细胞因子及其活性的检测

第一节ELISA法定量检测细胞因子

第二节ELISPOT法检测细胞因子分泌细胞

第三节流式细胞仪检测细胞内细胞因子

第四节细胞因子依赖细胞株检测细胞因子活性

MTT比色分析法

参考文献

第二部分与分子免疫学有关的生物信息学

第九章生物信息学简介

第十章核酸与蛋白质数据库

第一节核酸数据库

一、子数据库及其命名

二、核酸序列数据库格式

三、核酸数据库的检索

第二节蛋白质序列数据库

一、蛋白质序列数据库简介

二、蛋白质序列数据库的检索

第三节蛋白质结构数据库

一、PDB数据库检索

二、PDB数据库格式

第十一章序列比对分析

第一节两序列比对分析

一、两序列对比分析

二、序列两两比对的数据库相似性检索分析

第二节多序列比对分析

第十二章核酸与蛋白质结构预测

第一节核酸结构预测

一、核酸序列的一级结构及翻译

二、密码子偏好性分析

三、RNA二级结构预测

第二节蛋白质序列分析

一、蛋白质一级序列分析

二、蛋白质序列的反向翻译

第三节蛋白质二级结构及其预测

一、蛋白质二级结构

二、蛋白质二级结构预测

第四节蛋白质空间结构预测及常用在线预测方法

一、蛋白质空间结构预测

二、常用在线预测方法

三、常用在线预测方法实例

第十三章蛋白质相互作用理论模拟

第十四章抗原表位预测

第十五章免疫信息学

一、IMGT数据库

二、KABAT数据库

三、dbMHC

四、AntiJen

五、SYFPEITHI

六、HDB

七、MHCBN

八、BCIPEP

第十六章免疫学相关重要Web网站的简介

参考文献

第三部分分子生物学技术

第十七章基本分子生物学技术

第一节质粒DNA的分离、纯化和鉴定

第二节DNA酶切及凝胶电泳

第三节大肠杆菌感受态细胞的制备和转化

第四节RNA的提取和cDNA合成

第五节重组质粒的连接、转化及筛选

第六节基因组DNA的提取

一、细菌基因组DNA的制备

二、基因组DNA的检测

参考文献

第十八章PCR技术

第一节PCR克隆基因

第二节PCR法进行基因突变

第三节PCR法全合成新基因

参考文献

第十九章分子文库的构建及筛选

第一节cDNA文库的构建及筛选

第二节噬菌体展示文库的构建及筛选

参考文献

第二十章分子杂交技术

第一节核酸探针以及制备方法

一、双链DNA探针及其标记方法

二、单链DNA探针

三、末端标记DNA探针

四、寡核苷酸探针

五、RNA探针

六、几种常见的非同位素标记探针的方法

第二节几种常见的杂交

一、Southern杂交

二、Northern杂交

三、菌落原位杂交

四、斑点杂交

第三节杂交反应的条件及参数的优化

参考文献

第二十一章RNAi技术

参考文献

第四部分信号转导常用研究技术

第二十二章信号转导蛋白的活化水平分析

第一节免疫细胞化学

第二节激酶活性测定

第三节凝胶阻滞电泳

参考文献

第二十三章第二信使含量测定

第一节Ca2+测定

第二节IP3的测定

第三节cAMP的测定

参考文献

第二十四章亚细胞定位分析

第一节细胞分步分离法

第二节免疫荧光结合激光共聚焦显微镜分析

参考文献

第二十五章蛋白?蛋白相互作用分析

第一节免疫共沉淀检测蛋白?蛋白相互作用

第二节GSTpulldown

第三节采用GFP和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用

第四节酵母双杂交

参考文献

第二十六章蛋白?DNA相互作用分析

第一节CHIPAssay

第二节报道分子测定

参考文献

第二十七章磷酸化多肽双向作图和磷酸氨基酸分析

第一节磷酸化多肽双向作图

第二节磷酸氨基酸分析

参考文献

第二十八章蛋白质组学的双向电泳与生物质谱

第一节双向电泳技术

第二节生物质谱技术

考马斯亮蓝染色的胶内酶切

参考文献

　　本书试图避免过多原理方面的介绍，又力求克服纯粹描述试验步骤的缺点，其特点是实用性和可行性。在实验方法的选择上尽可能选用常见的和我们实践过的方法，力求使读者按本书介绍的方法操作即可开展工作并获得满意结果。本书分为四个部分，第一部分介绍免疫学常用技术，第二部分介绍如何利用生物信息学进行免疫学研究，第三部分介绍免疫学研究中常用的分子生物学技术，第四部分介绍信号转导常用研究技术。本书尽量介绍常用可行的方法。有些地方为了方法的连续性，难免有所重复。　　迄今，免疫学技术已广泛应用到生命科学研究的各个领域。本书涵盖了目前常用的常规免疫学技术方法、分子生物学方法、生物信息学分析方法以及信号转导研究常用的方法。除了简单介绍各个常用实验技术的基本原理，还根据作者长年的工作经验，在关键方法或步骤中提供了注意事项，归纳和阐述了具体实验中可能遭遇的问题和困惑，并对实验失败的原因给予了分析。　　本书适用于已经开始或正计划使用免疫学技术进行实验研究的本科生、研究生、科研工作者以及临床检验工作者。