生物分离工程实验

第一篇生化物质分离纯化技术的基本原理

第一章培养液的预处理

一、凝聚和絮凝

二、加沉淀剂

三、调节培养液的pH

四、吸附作用

第二章细胞破碎

一、机械法

二、非机械法.

第三章基因工程菌包涵体的分离纯化

一、包涵体的洗涤和目标蛋白的变性溶解

二、目标蛋白的复性

第四章沉淀法

一、盐析法沉淀蛋白质

二、等电点沉淀法

三、有机溶剂沉淀法

四、其他沉淀方法

第五章膜分离技术

一、膜分离技术的分类

二、膜的性能参数

三、膜的结构和材料

四、膜组件型式和操作方式

五、浓差极化

六、影响膜分离的因素

七、膜的污染和清洗

八、膜亲和过滤法

第六章有机溶剂萃取法

一、基本原理和操作

二、分配系数和弱电解质的分配平衡

三、影响萃取操作的因素

第七章两水相萃取

一、基本概念

二、成相系统

三、分配平衡

四、影响分配系数K，‘的因素

五、亲和分配

第八章反胶束萃取

一、基本概念和反胶束相系统

二、反胶束萃取过程

三、影响反胶束萃取的因素

四、亲和反胶束萃取

第九章超临界流体萃取

一、超临界流体的特性

二、超临界流体的溶解性能

三、超临界流体萃取的基本操作和设备

四、夹带剂对超临界C02流体萃取的强化作用

五、超临界萃取的特点和应用

第十章微波萃取技术

一、基本原理

二、微波萃取的特点

三、影响微波萃取的因素

四、微波萃取设备

五、微波萃取技术的应用

第十一章离子交换法

一、离子交换剂

二、离子交换树脂的分类

三、离子交换树脂几个主要的物理参数

四、离子交换树脂的交换能力和选择性

五、离子交换树脂和操作条件的选择

第十二章大网格(大孔)树脂吸附法

一、大网格树脂吸附剂的结构和类型

二、吸附等温线

三、大网格树脂吸附法提取生化物质工艺条件的选择

第十三章色层分离法

一、基本概念

二、凝胶层析

三、离子交换层析

四、亲和层析

第十四章电泳技术

一、基本原理

二、凝胶电泳

三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

四、等电聚焦电泳

参考文献

第二篇生物分离工程基础实验

实验一絮凝技术预处理发酵液及滤饼的质量比阻测定

实验二碱性蛋白酶的盐析沉淀

实验三Folin法测定碱性蛋白酶活性

实验四有机溶剂萃取法中pH对表观分配系数的影响

实验五反胶束萃取法pH对萃取率的影响

实验六PEG／(NH。)：SO。两水相系统的相图

实验七两水相系统中蛋白质分配系数的测定

实验八考马斯亮蓝比色法测定蛋白质含量

实验九离子交换树脂总交换容量的测定

实验十大网格吸附树脂的吸附等温线的制作

实验十一凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量

实验十二聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点

第三篇生物分离工程大型综合实验

实验一四环素的沉淀法提取及鉴定

Ⅰ四环素的沉淀法提取工艺

Ⅱ比色法测定四环素的化学效价

Ⅲ薄板层析法鉴定四环素成品纯度

实验二用超滤技术浓缩和分离碱性蛋白酶

实验三用两种分离技术提取红霉素的工艺比较

Ⅰ有机溶剂萃取法制备硫氰酸红霉素的工艺研究

Ⅱ大网格树脂吸附法提取红霉素的工艺研究

Ⅲ比色法测定红霉素效价

实验四用反胶束萃取技术提取胰蛋白酶

Ⅰ反胶束萃取法提取胰蛋白酶的工艺研究

Ⅱ胰蛋白酶酶活和比活的测定方法

实验五超临界萃取青蒿素和：HPIc鉴定

Ⅰ超临界CO：流体萃取青蒿素

Ⅱ用高效液相色谱(HPLc)鉴定青蒿素纯度

实验六用微波萃取和大网格树脂吸附法提取茶多酚

Ⅰ微波萃取和常规萃取提取茶多酚的工艺比较

Ⅱ大网格树脂吸附法精制茶多酚

Ⅲ酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量

实验七用两种分离技术提取柠檬酸的工艺比较

Ⅰ钙盐沉淀法提取柠檬酸

Ⅱ离子交换法提取柠檬酸

实验八离子交换法提取抗生素的工艺研究

实验九离子交换法制备纯水

实验十凝胶层析法纯化胰激肽原酶

ⅠSephadexG-75凝胶层析法纯化胰激肽原酶

Ⅱ紫外分光光度法测定胰激肽原酶活性

实验十一重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离和纯化

Ⅰ菌体的细胞破碎和前处理

Ⅱ亲和层析法纯化目标蛋白

ⅢSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定相对分子质量及纯度

实验十二基因工程血管生长抑素包涵体的变性和复性工艺研究

I菌体的细胞破碎和洗涤

Ⅱ目标蛋白的变性溶解和凝胶层析纯化的工艺研究

Ⅲ目标蛋白的复性工艺研究

Ⅳ四唑盐(MTT)比色法检测细胞活性

实验十三包涵体TRAIL蛋白的复性和纯化

Ⅰ包涵体TRAIL蛋白复性的前处理

Ⅱ包涵体复性方法的研究

Ⅲ用亲和层析和离子交换层析法分离纯化目标蛋白复性液

附录一

一、实验室常用酸碱的密度和浓度

二、一些常见蛋白质相对分子质量参考值

三、一些常见蛋白质的等电点参考值

四、某些氨基酸的等电点参考值

五、硫酸铵饱和度计算表

六、酸度计标准缓冲溶液的配制方法

七、常用缓冲溶液的配制方法

　　本书是生物技术和生物工程专业规划教材之一，扼要地叙述了生物分离工程实验相关的各种分离技术的基本原理，对分离技术中的各种实验技能和方法做了重点阐述。是奉献给生物工程、生物技术专业的师生和对生物分离技术实验感兴趣的读者。内容涉及面广，实验内容基本将现有的生物分离技术都包括进去了，不仅保留了目前还应用较多的传统分离技术，也包括了近年来发展起来的各种新技术和新方法。涉及的实验对象不仅有微生物发酵液和基因工程菌的细胞培养液，还有动、植物天然产物的分离纯化过程；不仅包括了中、小分子物质的分离过程，还有蛋白质和酶等生物大分子物质的分离纯化过程。本书主要适于生物技术和生物工程专业本科生使用，也适于相关专业研究生选用，还可供科研人员查阅参考。　　本书为高等院校生物分离工程实验教材。全书分为三篇，第一篇为生化物质分离纯化技术的基本原理，简明扼要地叙述了与生物分离工程实验相关的各种分离技术的基本原理；第二篇为生物分离工程基础实验，重点在于各种分离技术的参数测定及基本实验技能的训练；第三篇为生物分离工程大型综合实验，着重于综合型、科研型的实验。本书内容丰富，涉及面广，实验内容不仅有常用的传统生物分离技术，如沉淀法、有机溶剂萃取法、离子交换和大网格树脂吸附法，还涉及近年来发展的各种新分离技术和方法，包括新型的萃取技术，膜分离技术，层析(色谱)技术和电泳技术。涉及的实验对象不仅有微生物发酵液和基因工程菌的细胞培养液，还有动植物天然产物的分离纯化过程；不仅包括了中、小分子物质的分离过程，还有蛋白质和酶等生物大分子物质的分离纯化技术。本书的实验操作方法叙述详细，可操作性强。　　本书主要适于生物技术和生物工程专业本科生使用，也适于相关专业研究生选用，还可供科研人员查阅参考。