医学细胞生物学与遗传学实验教程

第一部分 医学细胞生物学

上篇 基本实验

第一章 显微镜的构造和使用

实验1-1 普通光学显微镜的构造和使用方法、细胞的基本形态结构的观察

实验1-2 倒置相差显微镜的构造与使用

实验1-3 显微镜测微尺的使用

第二章 流式细胞仪技术与应用

实验2-1 流式细胞仪结构原理及应用

实验2-2 流式细胞仪检测细胞周期

实验2-3 流式细胞仪检测细胞凋亡

实验2-4 流式细胞仪检测细胞中抗原

第三章 细胞器结构的观察与分离

实验3-1 细胞器的电镜照片及结构描述

实验3-2 细胞器分级分离

第四章 细胞化学方法和细胞化学成分显示

实验4-1 细胞化学基本理论

实验4-2 细胞中骨架蛋白的显示与细胞形态的观察

实验4-3 Feulgen法显示脱氧核糖核酸

实验4-4 甲基绿一哌洛宁显示核酸

实验4-5 苏木素一伊红染色显示细胞核和细胞质

第五章 酶细胞化学

实验5-1 酶细胞化学的基本原理

实验5-2 碱性磷酸酶显示及用途

实验5-3 联苯胺法显示过氧化物酶及直用

实验5-4 詹纳斯绿显示活体细胞线粒体

实验5-5 通过琥珀酸脱氢酶活性进行MTT检测细胞相对存活率

第六章 免疫化学技术

实验6-1 免疫酶细胞化学法检测髓母细胞瘤细胞中P65蛋白的表达

实验6-2 免疫荧光染色显示髓母细胞瘤细胞中Hesl蛋白的分布

实验6-3 免疫组织化学法检测Hesl在胃癌组织中的表达与分布

第七章 细胞培养技术

实验7-1 细胞培养的基本原理与技术

实验7-2 细胞的原代培养

实验7-3 传代细胞培养

实验7-4 培养细胞的形态观察和计数

实验7-5 细胞冻存、复苏与运输

实验7-6 细胞克隆化培养

第八章 细胞行为学

实验8-1 细胞吞噬实验

实验8-2 细胞融合实验

实验8-3 细胞周期

实验8-4 小鼠减数分裂

实验8-5 细胞周期特定时相细胞同步化方法

实验8-6 细胞运动的观察

第九章 细胞衰老和凋亡的检测

实验9-1 苏木素-伊红染色法显示凋亡细包

实验9-2 Giansa染色法显示凋亡细胞

实验9-3 凋亡细胞的原位末端转移酶标记法（TUNEL法）

实验9-4 细胞凋亡的琼脂糖凝胶电泳检测

实验9-5 细胞衰老的检测

第十章 蛋白质的分离与测定

实验10-1 真核细胞蛋白质提取

实验10-2 双缩脲法测定蛋白质浓度

实验10-3 福林一酚法测定蛋白质浓度

实验10-4 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度

实验10-5 蛋白质印迹免疫分析（Westernblotting）

下篇 综合实验

第十一章 小鼠胚胎干细胞培养

实验11-1 小鼠胚胎成纤维细胞的培养

实验11-2 饲养层细胞的制备

实验11-3 小鼠胚胎干细胞的分离及培养

第十二章 IL-6剥夺诱导小鼠B细胞杂交瘸细胞株7ID1细胞凋亡、观察及检测

实验12-1 小鼠B细胞杂交瘤细胞株7ID1细胞复苏与传代培养

实验12-2 7ID1细胞的凋亡诱导（IL-6剥夺）及细胞收集

实验12-3 IL-6剥夺诱导7TD1细胞凋亡的形态特征观察

实验12-4 IL-6剥夺诱导7TD1细胞凋亡的DNA提取及凋亡梯状带检测

第十三章 白藜芦醇诱导髓母细胞瘤细胞分化观察及相关基因的检测

实验13-1 细胞的培养与传代

实验13-2 白藜芦醇处理前后细胞数量及形态的观察以及免疫细胞化学染色

实验13-3 总RNA提取和分化相关基因突触素（synaptophysin）的RT-PCR检测

附录

附录一 试剂浓度的表示方法及其计算

附录二 常用人工合成细胞培养基的种类、化学组成及适用细胞

附录三 实验室常用细胞系（株）

附录四 离心机转数与离心力的换算表医学细胞生物学部分参考文献

第二部分 医学遗传学

上篇 基本实验

第一章 常见人类遗传性状的分析与遗传咨询

实验1-1 人遗传病的家系分析与讨论

实验1-2 Bayes法在遗传咨询中的具体应用

实验1-3 遗传度、杂合度、多态信息量和吻合度测验

实验1-4 遗传性疾病遗传方式的估计

实验1-5 多基因遗传的人类皮肤纹理分析

实验1-6 人类ABO血型的检测和遗传分析

实验1-7 人类苯硫脲（PTC）尝味能力的遗传分析

实验1-8 人类常见单基因性状的鉴定与群体遗传学分析

第二章 细胞遗传学相关的实验

实验2-1 人类性染色质标本的制备与观察

实验2-2 外周血淋巴细胞培养与染色体制备

实验2-3 小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察

实验2-4 染色体G显带技术

实验2-5 核型分析

实验2-6 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核测定

实验2-7 人类姐妹染色单体交换（SCE）标本的制备与观察（姐妹染色单体技术）

实验2-8 荧光原位杂交

第三章 分子遗传学相关的实验

实验3-1 真核生物组织及细胞基因组DNA提取

实验3-2 组织及细胞中RNA的提取

实验3-3 DNA与RNA含量测定

实验3-4 聚合酶链反应技术（PCR）体外扩增DNA片段

实验3-5 逆转录聚合酶链反应（Rr-PCR）

实验3-6 实时定量PCR（real-time-PCR）

实验3-7 DNA序列测定

实验3-8 质粒DNA提取

实验3-9 限制性核酸内切酶对DNA进行酶切

实验3-10 电泳分离酶切DNA片段

实验3-11 DNA片段的回收与纯化

实验3-12 目的基因与载体片段的连接

实验3-13 感受态细胞的制备

实验3-14 重组DNA的转化

实验3-15 重组质粒的筛选

实验3-16 核酸分子杂交技术

下篇 综合实验

第四章 基因多态性分析

第一节 概述

第二节 CYPIA1基因多态性与胃癌易感性的相关性研究

第五章 PCR-SSCP与基因点突变检测

第一节 概述

第二节 PCR-SSCP方法检测肿瘤细胞p53基因点突变

第六章 肿瘤细胞中基因印记状态的检测方法

第一节 概述

第二节 胃癌组织中胰岛素样生长因子-2基因印记缺失的检测

第七章 肿瘤组织中p16抑癌基因表达检测

第一节 概述

第二节 RT-PCR方法检测胃癌组织中p16抑癌基因表达情况

第八章 肿瘤细胞中抑癌基因异常高甲基化检测与分析

第一节 概述

第二节 胃癌细胞中抑癌基因p16启动子区异常甲基化检测

附录

附录一 SAGE技术

附录二 基因芯片技术

附录三 RNAi技术

附录四 MicroRNA技术

附录五 DNA甲基化检测技术

附录六 生物信息学研究方法医学遗传学部分参考文献

《中国科学院教材建设专家委员会规划教材·全国高等医药院校规划教材：医学细胞生物学与遗传学实验教程》是医学科学知识结构的重要组成部分。本教程涵盖了这两个学科常用实验方法中与基础和临床医学关系密切的内容。上篇对每个实验的目的、基本原理、操作流程和实验结果做了比较详细的介绍，而下篇则根据两个学科的进展和未来发展趋势，结合自身的教学和科研体验，分别归纳出两套可操作性较强，能够体现学科间交叉渗透特点的综合性实验。因此，本教程既可作为学生的教科书，也能成为他们日后的实验手册。