细胞与分子生物学实验教程

第一章 绪论

第一节 概述

第二节 课程设置与要求

第三节 实验的基本要求

一、实验室的要求

二、实验课的要求

三、实验记录的要求

第四节 实验报告的撰写

第二章 基础实验

第一节 电泳技术

实验一 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳

实验二 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离蛋白质

实验三 血清脂蛋白琼脂糖电泳

实验四 免疫电泳与对流免疫电泳

第二节 层析技术

实验五 凝胶柱层析分离鉴定蛋白质

实验六 DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析

实验七 离子交换层析分离氨基酸

第三节 离心技术

实验八 差速离心法从鼠肝中提取核糖核蛋白体和核蛋白体RNA

一、提取核糖核蛋白体

二、提取核蛋白体RNA

实验九 蔗糖梯度离心法分步离心核糖核酸

实验十 小鼠脾单个核细胞的分离——密度梯度离心法

第四节 蛋白质技术

实验十一 血清免疫球蛋白的分离、纯化与定量

实验十二 细胞总蛋白的提取

实验十三 蛋白质定量测定方法——标准曲线法测定蛋白质含量

实验十四 Western印迹法检测表达蛋白

第五节 多聚酶链体外扩增技术（PCR）

实验十五 聚合酶链反应（PCR）

一、PCR技术检测β-actin基因

二、琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段

实验十六 逆转录PCR

一、Trizot法抽提总RNA

二、逆转录（RT）-PCR

实验十七 PCR单链构象多态性分析（示教）

第六节 免疫技术

实验十八 直接凝集试验——血型鉴定实验（玻片法）

实验十九 双向免疫扩散实验

实验二十 酶联免疫吸附实验（EUSA）——双抗体夹心法

实验二十一 细胞膜表面抗原检测——补体依赖的微量淋巴细胞毒实验

第七节 细胞分析技术

实验二十二 显微镜使用、细胞的基本形态与结构及细胞的化学成分分析

一、光学显微镜的使用方法

二、过氧化氢酶分解过氧化氢实验

三、蟾蜍血细胞内DNA的显示

四、几种特殊显微镜的基本原理和用途

实验二十三 动物原代细胞的培养

实验二十四 培养细胞的存活率检测

实验二十五 蟾蜍血细胞的体外融合

实验二十六 细胞有丝分裂及细胞骨架的显微观察

实验二十七 动物染色体的制备

第八节 染色体分析技术

实验二十八 外周血培养染色体制备技术

实验二十九 染色体标本G显带制备

实验三十 染色体C显带技术

实验三十一 人类染色体非显带核型分析

实验三十二 人类染色体G显带核型分析

第三章 其他基本实验技术

实验一 葡萄糖定量方法——标准管法测定葡萄糖含量

实验二 流式细胞术（示教）

实验三 图像分析／电镜观察（示教）

一、图像分析

二、电子显微镜观察

第四章 综合实验

实验一 基因组DNA分析

一、高分子量DNA的提取与纯化

二、DNA的酶解

三、琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段

四、DNA转移

五、探针标记

六、核酸分子杂交

实验二 兔肝碱性磷酸酶（AKP）的纯化及Km的测定

一、有机溶剂法部分纯化兔肝AKP

二、AKP比活性测定

三、DEAE纤维素（DE-52）离子交换层析进一步纯化AKP

四、AKP Km测定

五、结果

实验三 细胞凋亡检测

一、细胞凋亡诱导

二、琼脂糖凝胶检测凋亡细胞DNA ladder

三、TUNEL法检测凋亡细胞

实验四 临床标本处理、核酸、蛋白质表达和染色体定位

一、常见组织细胞的培养方法

二、肿瘤细胞的培养方法

三、细胞的冻存、解冻和计数方法

四、细胞与组织核酸的非放射性标记原位杂交检测技术

五、免疫细胞和组织异常蛋白表达的检测

六、基因的染色体定位

七、FISH技术与检测

第五章 设计性实验引导

第一节 设计性实验概述

第二节 设计性实验

实验一 选一种miRNA研究其与临床的关系

实验二 肿瘤细胞或组织相关细胞因子检测分析实验设计

实验三 培养环境中的葡萄糖浓度对细胞的影响

实验四 人体肿瘤小鼠移植瘤的建立和实验

实验五 糖代谢与肿瘤诊断和治疗

实验六 中药提取物对人类疾病的治疗作用

实验七 免疫细胞亚群分离与鉴定

实验八 细胞因子的测定

实验九 外环境对免疫功能影响的实验设计

实验十 免疫学快速检测方法的实验设计

实验十一 三体综合征的产前诊断方法

实验十二 镰形红细胞贫血的诊断方法

附录

附录一 实验误差及其产生原因与纠正

附录二 实验室注意事项及应急处理

《细胞与分子生物学实验教程（供临床医学口腔医学和相关医学专业使用）》是在自编教材《细胞与分子生物学实验指导》的基础上编写而成的。整合了细胞生物学、医学免疫学、医学遗传学、生物化学与分子生物学这些学科的实验教学，以独立设置的课程适应现代医学基础实验教学的进步与需要。
《细胞与分子生物学实验教程（供临床医学口腔医学和相关医学专业使用）》分成基础实验、其他基本实验技术、综合实验和设计性实验引导四个部分。以电泳技术、层析技术、离心技术、蛋白质技术、PCR技术、免疫学分析基本技术、遗传学的染色体制备分析技术和细胞学的细胞培养、显微镜使用作为基础实验，辅以教师的讲授和新技术的演示，形成新的细胞与分子生物学实验教学特色。综合实验将给予学生比较实用、连贯的实验技术训练。设计性实验引导将注重学生科研设计、综合分析和创新能力的培养。