拟南芥实验技术

前言

第1章 拟南芥概述

1.1 拟南芥的系统地位

1.2 拟南芥形态学与解剖学

1.2.1 根

1.2.2 茎

1.2.3 叶

1.2.4 花

1.2.5 果实和种子

1.3 拟南芥的模式植物特点

1.3.1 植株个体小

1.3.2 生长周期短

1.3.3 种子结实量大

1.3.4 自花授粉

1.3.5 易突变

1.3.6 基因组小

1.3.7 基因序列重复少

1.3.8 易进行遗传转化

1.3.9 遗传信息丰

第2章 拟南芥的培育

2.1 拟南芥的生长条件

2.1.1 光

2 1.2 温度

2.1.3 空气相对湿度

2.1.4 土壤水分

2.1.5 种植密度

2.1.6 pH值

2.1.7 生长基质

2.1.8 其他条件

2.2 播种与栽培

2.2.1 拟南芥无菌苗培养方法

2.2.2 拟南芥种子的土壤点播法

2.2.3 拟南芥无菌苗的移栽

2.2.4 拟南芥的水培法

2 2.5 拟南芥培育过程中的常见问题

2.2.6 种子的收获和保存

第3章 拟南芥的组织培养

3.1 纯性培养

3.2 诱导愈伤组织及植物的再生

3.3 悬浮培养

3.4 拟南芥原生质体的制备

第4章 拟南芥转基因途径

4.1 DNA转化的瞬时表达途径

4.1.1 基因枪转化

4.1.2 PEG介导的基因转化

4.2 农杆菌介导的稳定表达途径

4 2.1 农杆菌表达栽体的构建

4.2.2 拟南芥的种植

4.2.3 高效实用的拟南芥遗传转化途径

4 2.4 拟南芥转基因种子的筛选

第5章 拟南芥突变体的诱变及筛选

5.1 拟南芥突变体的诱变方法

5.1.1 物理诱变法

5.1.2 化学诱变法

5.1.3 生物诱变法

5.2 拟南芥突变体的表型筛选

5.2.1 子叶与叶型

5.2.2 种子

5.2.3 下胚轴

5.2.4 根

5.2.5 花

5.2.6 茎

5.2.7 角果

5.2.8 胚胎发生

5.2.9 激素反应

5.2.10 胁迫反应

5.3 拟南芥多基因突变体的获得

5.3.1 拟南芥人工杂交实验

5.3.2 双突变纯合体的筛选

5.3.3 T-DNA插入突变体的互补实验

5.4 拟南芥目的基因的RNAi技术

第6章 拟南芥实验材料的提取

6.1 拟南芥总DNA的提取

6.1.1 CTAB精提法

6.1.2 SDS法

6.1.3 试剂盒法

6.2 拟南芥核DNA的提取

6.3 拟南芥细胞器DNA的提取

6.4 拟南芥RNA的提取

6.4.1 CTAB法提取RNA

6.4.2 Trizol法快速提取植物组织RNA

6.4.3 试剂盒法提取RNA

6.4.4 总.RNA中mRNA的分离

6.5 拟南芥蛋白质的提取

6.5.1 三氯醋酸-丙酮沉淀法

6 5 2 （NH4）2S04沉淀法

第7章 拟南芥研究中常用的细胞学方法

7.1 拟南芥组织的石蜡切片技术

7.2 拟南芥组织的冰冻切片技术

7.3 拟南芥花粉表型的分析

7.4 拟南芥胚珠透明技术

7.5 拟南芥基因表达的cDNA微阵列检测技术

参考文献

附录

附录1：B5（Gmborg）培养基的配制

附录2：N6培养基的配制

附录3：拟南芥PNs营养液的配制

附录4：Gus染液的配制

附录5：模式植物拟南芥生物信息学资源网站

附录6：缩写词

拟南芥作为一种珍贵的植物实验模型，对于理解高等植物的生理生化、遗传、变异、发育等基本过程具有重要意义。 拟南芥研究领域涉及生物学及遗传学的许多方面，曲冠证等编著的《拟南芥实验技术》主要介绍拟南芥研究最基础的实验技术。本书的特点是：以拟南芥基因工程相关实验为主线展开，从拟南芥的培育、遗传转化、阳性筛选、功能验证等方面，将理论与实验结合，原理与技术融汇，开拓读者思路，提供研究方法，以解决拟南芥研究者在研究初期经常碰到的一些问题，而且很多问题也是编者在拟南芥研究过程中所碰到过的一些问题。 本书共7章，包括拟南芥概述、拟南芥的培育、组织培养、转基因途径、突变体的诱变及筛选、拟南芥实验材料的提取与常用的细胞学方法等。