转基因猪制备技术

序

前言

第一章 概述

第一节 转基因动物的产生和发展

一、转基因动物的产生

二、动物转基因技术的发展

三、转基因动物应用领域的拓展

第二节 转基因猪技术现状及应用前景

一、转基因猪技术现状

二、转基因猪的应用现状与前景

参考文献

第二章 猪的配子与胚胎操作技术

第一节 猪精液的采集、保存和输精技术

一、猪精液的采集

二、精液的质量检查和评定

三、精液的保存

四、输精技术

第二节 母猪的同期发情和超数排卵技术

一、母猪的同期发情技术

二、母猪的超数排卵技术

第三节 猪胚胎的采集和移植技术

一、胚胎的采集

二、胚胎的移植

第四节 猪卵母细胞体外成熟及体外受精技术

一、猪卵母细胞的采集

二、猪卵母细胞的体外成熟

三、猪精子的体外获能

四、体外受精技术

五、胞质内单精注射技术

第五节 猪体细胞核移植（克隆）技术

一、供体细胞的选择

二、供体细胞的制备方法

三、受体细胞的制备

四、核移植操作技术

五、融合及激活技术

六、手工克隆技术

七、重构胚的培养

八、重构胚的移植

九、猪体细胞核移植存在的问题及应用前景

第六节 猪的iPS技术

一、iPS细胞的制备技术

二、猪iPS技术的应用前景

三、iPS细胞目前存在的问题

第七节 配子与胚胎操作的环境控制

一、影响配子与胚胎操作的环境因素

二、灭菌技术

三、玻璃及塑料制品的清洗

四、配子与胚胎操作室的设计及环境管理

参考文献

第三章 猪的基因工程技术

第一节 转基因猪表达载体的构建

一、目的基因及其全长序列的获取

二、启动子的选择

三、报告基因

四、调控元件

五、动物基因工程常用载体

六、载体构建的一般流程

第二节 基因打靶技术及其策略

一、基因打靶载体的类型和构建方法

二、胚胎干细胞基因打靶

三、体细胞基因打靶

四、基因打靶技术的发展及复杂调控

五、基因打靶技术的应用和展望

第三节 RNAi基因沉默载体的构建

一、RNAi的研究

二、RNAi的分子机制

三、shRNA表达载体构建

四、基因沉默技术在猪遗传改良上的应用

第四节 其他猪基因组靶向修饰技术

一、锌指核酸酶

二、TALEN

三、PhiC31整合酶

参考文献

第四章 猪的转基因技术

第一节 显微注射法

一、原核胚的获取

二、基因的显微注射

三、注射胚的移植

四、原核注射法制备转基因猪的效率

五、提高转基因效率的措施

六、通过显微注射法实现基因的定位修饰和整合

第二节 猪精子介导法

一、精子介导转基因的机理

二、精子介导制备转基因猪的方法

第三节 体细胞核移植介导法

一、供体细胞的选择及建系

二、细胞的基因转染

三、细胞筛选和阳性单克隆培养

第四节 逆转录病毒感染法

一、逆转录病毒载体的构建

二、利用逆转录病毒载体制备转基因猪的路径

第五节 其他制备转基因猪的方法

一、精原干细胞途径

二、人工染色体技术

参考文献

第五章 转基因猪的检测

第一节 可视化识别检测

一、荧光标记

二、肤色标记

第二节 整合检测

一、样品的采集

二、DNA的提取

三、聚合酶链式反应（PCR）

四、DNA斑点杂交

五、Southerln印记杂交

六、外源基因整合位点的检测——染色体原位杂交技术

七、转基因整合拷贝数的测定

第三节 转基因猪外源基因的转录分析——mRNA检测

一、组织或细胞中总RNA提取

二、Northern印迹杂交

三、RNase保护分析

四、逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）

五、RNA斑点杂交

第四节 转基因猪翻译水平——蛋白质产物检测

一、蛋白质印迹技术

二、免疫组织化学检测

第五节 转基因猪表达产物的生物活性分析及功能测试

一、表达产物的生物活性分析

二、表达产物的功能测试

参考文献

第六章 转基因猪的安全调控技术

第一节 转基因猪的安全性分析及解决方案

一、转基因猪对食品均安全性分析及解决方案

二、转基因猪对环境的安全性分析及解决方案

三、转基因猪自身的安全性分析及解决方案

第二节 标记基因的删除技术

一、hit and run法

二、双置换法

三、位点特异性重组技术

第三节 组织特异性表达

第四节 外源基因的诱导表达

一、四环素诱导表达系统

二、蜕皮激素诱导表达系统

三、他克莫司／雷帕霉素诱导系统

四、RU486诱导系统

参考文献

第七章 转基因猪新品种培育

第一节 外源基因在G0代中的整合状况及遗传稳定性

一、随机整合

二、定位整合

第二节 G0代转基因猪的选择

一、选择的内容和目标

二、选择程序

第三节 转基因猪纯合子的建立

一、通过常规繁育技术建立转基因猪纯合子

二、通过重复打靶技术建立转基因猪纯合子

三、基因编辑技术

第四节 转基因猪新品种的培育

一、转基因猪新品种的培育目标

二、转基因猪新品系的建立

三、转基因猪新品种的建立

四、转基因猪新品种的利用

五、转基因猪种质资源的保存

参考文献

第八章 转基因猪的安全管理和安全评价

第一节 我国农业转基因生物的安全管理体系

一、我国农业转基因生物安全管理的法规建设

二、我国农业转基因生物的管理和监控体系

第二节 转基因猪的安全控制

一、转基因实验猪场的安全控制

二、转基因实验猪场的卫生防疫

三、转基因实验猪场猪群处置规则

第三节 转基因猪的安全评价

一、转基因猪安全评价的内容

二、各阶段的申报程序

参考文献

《转基因猪制备技术》首先概述了转基因动物和转基因猪的产生、技术发展和应用概况，然后介绍了与转基因猪制备相关的配子与胚胎操作技术以及基因工程技术。在此基础上，着重阐述了转基因猪的各种构建技术及检测技术。
　　转基因猪研究的最终目标是培育新品种并在养猪生产中应用，因此论述了在获得原代转基因猪之后，新品种培育的理论、方法和途径。由于转基因生物的安全性意义重大，《转基因猪制备技术》将转基因猪的安全调控技术及安全管理和安全评价作为独立的两章，分别进行了叙述和讨论。《转基因猪制备技术》突出了实用性和可操作性，将技术操作方面的内容作为重点，在阐述高技术层面操作的同时，兼顾了常规技术层面和基本技能的操作。《转基因猪制备技术》可为农业、医学和基础生物学领域相关的研究、推广、生产和管理人员提供参考，也可作为有关专业的本科生和研究生参考教材。