高级生物化学实验

第一章缓冲溶液的作用原理及配制

第一节缓冲溶液的作用原理

一、缓冲溶液的作用原理

二、缓冲容量与缓冲范围

第二节缓冲溶液的配制

一、影响缓冲溶液pH的因素及缓冲溶液的选择与配制

二、缓冲溶液的应用原则

三、不同缓冲溶液的优缺点

第二章生物材料的预处理

第一节生物样品的保存

一、新鲜固态样品的保存

二、液态样品的保存

第二节生物材料预处理技术

一、细胞的破碎

二、提取与纯化

第三章实验误差控制

第一节实验误差

一、实验误差

二、精密度和偏差

三、实验误差的来源

第二节提高准确度的方法

一、减少系统误差的方法

二、减少偶然误差的方法

三、正确取舍有效数字

第四章蛋白质研究技术与方法

第一节蛋白质分离纯化的一般方法

一、以蛋白质溶解度为基础的分离方法

二、以蛋白质电荷性质为基础的分离方法

三、以蛋白质分子大小为基础的分离方法

四、以蛋白质生物活性为基础的分离方法

第二节蛋白质分离纯化的新技术与新方法

一、蛋白质二维荧光差异凝胶电泳技术

二、毛细管电泳

三、反相液相色谱法

四、反胶团萃取法

五、蛋白质分离方法的选择、组合和优化

实验一蛋白质含量测定法

Ⅰ.微量凯氏定氮法(Kjeldahl法)

Ⅱ.双缩脲法(Biuret法)

Ⅲ.Folin-酚试剂法(Lowry法)

Ⅳ.考马斯亮蓝法(Bradford法)

Ⅴ.紫外吸收法

Ⅵ.二喹啉甲酸法(BCA法)

实验二小麦钙调蛋白的分离、 纯化

实验三小麦钙调蛋白的抗体制备及检测

实验四植物组织蛋白质二维电泳分离分析

第五章酶学研究技术与方法

第一节酶活力测定及酶的纯度与回收率

一、酶活力测定

二、纯化方法与条件的比较标准

三、纯度标准

第二节酶活力测定的常用技术和方法

一、量气法

二、比色法与分光光度法

实验五苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定

Ⅰ.PAL的提取及测定——离心和盐析的应用

Ⅱ.PAL的纯化——分子筛和离子交换层析的应用

实验六Eadie-Hofstee法测定辣根过氧化物酶的Km和vmax

实验七酶偶联分析法测定植物己糖激酶的活力

实验八两相分配法制备大豆子叶质膜及其纯度鉴定

实验九金属螯合亲和层析分离纯化玉米SOD

实验十大豆胰蛋白酶抑制剂的分离提取以及生物化学性质表征

第六章核酸研究技术和方法

第一节核酸研究的基本要求

一、材料与方法的选择

二、选择的原则

三、核酸完整性的保持

第二节技术路线的设计

一、核酸的释放

二、核酸的分离与纯化

三、核酸质量与提取步骤的关系

四、核酸的浓缩、沉淀与洗涤

实验十一植物基因组DNA的提取及含量、纯度检测

Ⅰ.植物基因组DNA的提取(CTAB法)

Ⅱ.植物DNA纯度的鉴定——紫外分光光度计法

Ⅲ.植物DNA相对分子质量的测定——琼脂糖凝胶电泳法

实验十二一步法共提取昆虫中肠DNA、RNA及蛋白质

实验十三小RNA的分离纯化

Ⅰ.小RNA分离、纯化及修饰

Ⅱ.修饰后小RNA的克隆转化及测序

Ⅲ.测序结果的生物信息学分析

实验十四油菜cDNA文库的构建

Ⅰ.植物组织总RNA的提取及电泳分析

Ⅱ.cDNA文库的构建

实验十五Southern印迹

第七章糖类研究技术和方法

第一节糖生物化学研究总论

第二节糖的提取及纯化

第三节多糖的组成分析

第四节多糖的结构分析

实验十六还原糖和总糖的测定

实验十七非还原糖的高效液相色谱分析

实验十八可溶性糖的硅胶G薄层层析

实验十九黏多糖一肝素效价的测定

实验二十水溶性苦瓜多糖的制备及分离纯化

实验二十一醋酸纤维素薄膜电泳鉴定山楂多糖

实验二十二多糖结构分析

Ⅰ.糖含量测定

Ⅱ.单糖组成分析

Ⅲ.糖链的序列测定

第八章植物次生代谢物概述

第一节次生代谢物的概念与特性

一、次生代谢物的概念

二、次生代谢物的特性

第二节次生代谢物的研究方法

一、同位素示踪法

二、细胞培养法

三、荧光标记法

四、单细胞凝胶电泳法

实验二十三红豆杉紫杉醇生物碱的分离与鉴定

实验二十四植物倍半萜的分离与酸化度分析

实验二十五黄连中黄连素的提取及其紫外光谱分析

Ⅰ.黄连中黄连素的提取

Ⅱ.黄连素的紫外光谱分析

实验二十六虎杖蒽醌类成分的提取分离及结构鉴定

实验二十七植物材料中总黄酮分离提取及鉴定

实验二十八从茶叶中提取咖啡因

附录

附录一离心技术

附录二常用蛋白质Mr标准参照物

附录三常用缓冲溶液的配制方法

附录四实验室中常用酸碱的相对密度和浓度

附录五硫酸铵饱和度的常用表

附录六常用相关网站

主要参考文献

本书是根据国内外生物化学技术的最新研究进展和发展趋势，结合各高校近十年来的科学研究和实验教学，经反复修改、充实撰写而成。编者均为各高等院校从事生物化学教学的资深教师。全书共分8章包含一些生物大分子的分离、层析、电泳等传统实验项目，旨在加强研究生基本实验方法和技能的训练，同时又编入了近年来发展起来的一些综合性实验技术，将生物化学实验技能集成化。本书宗旨在于培养学生严谨求实的科研态度、分工协作的团队精神、创造性思维和独立分析与解决问题的能力。书末的附录还包括了离心原理、常用试剂和溶液的配制等。本书适用于高等院校农林和生物学等专业研究生和本科生选择使用。