分子生物学实验指导

第一篇 常用分子生物学实验技术及原理

第一章 载体

第二章 工具酶

第三章 电泳

第四章 真核生物基因组文库的构建

第五章 cDNA文库的构建

第六章 PCR基因扩增

第七章 克隆化DNA的定点突变

第八章 DNA序列测定

第九章 基因表达

第十章 印迹法及分子检测

第十一章 实时荧光定量PCR技术

第二篇 学生实验

实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化

实验二 质粒DNA的提取及其定性定量分析

实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA

实验四 PCR基因扩增及产物的回收

附 扩增片段的全序列

实验五 DNA重组

实验六 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达及检测

Ⅰ 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达

Ⅱ 活性分析检测表达蛋白

Ⅲ SDS-PAGE检测表达蛋白

实验七 蛋白质印迹

附 小鼠腹水多克隆抗体制备

实验八 哺乳动物基因组DNA的分离及分析

实验九 植物基因组DNA的提取

实验十 大肠杆菌基因组DNA的提取

实验十一 植物总RNA的提取

实验十二 RT-PCR（反转录-聚合酶链反应）

附 β-微管蛋白编码序列

实验十三 实时荧光定量PCR对小鼠脾细胞特定基因表达的分析

实验十四 利用聚合酶链反应（PCR）定点突变

实验十五 寡核苷酸介导的定点突变

实验十六 Southern杂交

Ⅰ 大肠杆菌基因组DNA Southern杂交

Ⅱ 小鼠肝基因组DNA Southern杂交

实验十七 双脱氧链终止法测定DNA序列

实验十八 DNA核苷酸序列分析——银染色法

实验室仪器操作技术

实验设计选录

分子克隆经验小结

附录

一、常用核酸、蛋白质换算数据

二、氨基酸符号及相应密码子

三、常见市售酸碱的浓度

四、离心机转速与相对离心力的换算

五、常用电泳缓冲液及凝胶加样缓冲液

六、常用限制酶酶切位点及缓冲液

七、分子生物学常用试剂和缓冲液的配制

八、常用细菌培养基和抗生素溶液

九、X射线底片的冲洗方法

十、溴化乙锭溶液的净化处理

《分子生物学实验指导（第3版）/“十二五”普通高等教育本科国家级规划教材》是一本简明实用且与目前高校实验教学相适应的分子生物学实验指导用书。全书分为两篇：第一篇简明介绍了分子生物学的实验方法和理论；第二篇选编了18个学生实验，包括感受态细胞的制备和转化，质粒DNA的提取和分析，琼脂糖凝胶电泳检测DNA，PCR基因扩增，DNA重组，基因表达和检测，蛋白质印迹，基因组DNA的分离和分析，总RNA的提取和分析，RT-PCR，实时荧光定量PCR，定点突变，Southern杂交，DNA序列测定等内容。
　　第3版新增加了实时荧光定量PCR实验，在Southern杂交实验中补充了真核基因方面的内容，改进了寡核苷酸介导的定点突变实验的方法，删除了PCR法差异显示mRNA实验。在许多实验中增加了警告、提示和需要注意的内容，并在每个实验后面加设了思考题。建设了与教材配套的“数字课程”（http：//abook.hep.com-cn/41894），涵盖实验操作录像、课堂讲解实录、教学PPT、实验室仪器操作技术、实验设计选录、分子克隆经验小结等内容，以期进一步提高实验教学效率，培养学生的基本实验技能、独立分析和解决问题的能力和创新思维。
　　《分子生物学实验指导（第3版）/“十二五”普通高等教育本科国家级规划教材》适合作为高等院校生物类专业及农林、医药院校开设分子生物学实验的教学用书，也可供有关研究人员和技术人员参考。