分子生物学实验方法与技巧

第1章 实验前后的注意事项和行为准则

1.1 实验过程中的注意事项

1.1.1 实验前的注意事项

1.1.2 实验中的注意事项

1.1.3 实验后的注意事项

1.2 实验室成员的基本素质与行为准则

1.3 实验中的一些技巧及心得

1.3.1 提取高质量的RNA的技巧

1.3.2 细胞冻存及复苏

1.3.3 稳定转染后的检测方法

1.3.4 连接转化实验心得

1.3.5 Western B1ot

参考文献

第一部分 DNA相关的操作

第2章 质粒DNA的相关实验

2.1 质粒DNA的分离与纯化

2.1.1 概述

2.1.2 实验材料、仪器和试剂

2.1.3 实验原理、操作步骤和实验要点

2.2 DNA酶切与电泳分析

2.2.1 概述

2.2.2 实验材料、仪器和试剂

2.2.3 实验原理、操作步骤和实验要点

2.3 重组质粒的连接、转化及筛选

2.3.1 概述

2.3.2 实验材料、仪器和试剂

2.3.3 实验原理、操作步骤和实验要点

参考文献

第3章 聚合酶链式反应

3.1 标准PCR反应和扩增产物克隆

3.1.1 概述

3.1.2 实验材料、仪器和试剂

3.1.3 实验原理、操作步骤和实验要点

3.2 反转录PCR(RT-PCR)

3.2.1 概述

3.2.2 实验材料、仪器和试剂

3.2.3 实验原理、操作步骤和实验要点

3.3 出错PCR(致突变PCR)

3.3.1 概述

3.3.2 实验材料、仪器和试剂

3.3.3 实验原理、操作步骤和实验要点

3.4 基于重叠延伸PCR的DNA合成技术

3.4.1 概述

3.4.2 实验材料、仪器和试剂

3.4.3 实验原理、操作步骤和实验要点

参考文献

第4章 限制性内切酶的特性及应用

4.1 概述

4.2 实验方案

4.2.1 单限制性内切酶对单DNA样品的消化

4.2.2 消化多个DNA样品

4.2.3 多限制性内切酶消化DNA样品

4.2.4 限制性内切酶对DNA的部分消化

4.2.5 DNA的甲基化

4.3 相关知识

4.3.1 背景知识

4.3.2 关键因素

4.3.3 时间安排

4.3.4 预期结果

参考文献

第5章 基因组DNA的提取

5.1 动物组织基因组DNA的提取

5.1.1 概述

5.1.2 实验材料

5.1.3 实验步骤

5.1.4 关键因素

5.1.5 常见问题

5.1.6 所需时间

5.1.7 本节溶液配制

5.2 植物组织基因组DNA的提取

5.2.1 基本方案——氯化铯离心法

5.2.2 备选方案——CTAB法

5.3 人白细胞DNA的提取

5.3.1 概述

5.3.2 实验材料

5.3.3 实验步骤

5.3.4 关键因素

5.3.5 所需时间

5.4 DNA琼脂糖凝胶电泳及回收

5.4.1 琼脂糖凝胶分离：DNA

5.4.2 基本方案1——DNA电洗脱

5.4.3 基本方案2——NA-45纸电泳法

5.4.4 基本方案3——用低熔点琼脂糖凝胶分离DNA片段

5.4.5 备选方案l——使用B-琼脂糖酶从低熔点琼脂糖中回收DNA

5.4.6 备选方案2——用玻璃珠法从低熔点琼脂糖中回收DNA

5.4.7 本节溶液配制

5.5 非变性聚丙烯酰胺胶电泳及DNA回收

5.5.1 基本方案

5.5.2 备选方案——通过电洗脱从聚丙烯酰胺凝胶纯化片段

参考文献

第6章 分子探针及Southern杂交

6.1 探针的种类及其选择

6.1.1 探针的概念

6.1.2 探针的种类及其选择

6.2 探针标记物的种类及其选择

6.2.1 核素标记物

6.2.2 非放射性标记物

6.3 探针标记方法及其选择

6.3.1 双链DNA探针标记方法

6.3.2 单链DNA探针标记方法

6.3.3 末端标记DNA探针

6.3.4 寡核苷酸探针标记方法

6.3.5 RNA探针

6.4 探针的纯化

6.4.1 乙醇沉淀法

6.4.2 Sephadex G-50柱层析法

6.4.3 微柱离心法

6.5 Southern杂交

6.5.1 实验原理

6.5.2 基因组Southern Blot步骤

6.5.3 背景信息

6.5.4 关键参数

6.5.5 问题解决方法

6.5.6 预期结果

6.5.7 时间控制

6.5.8 优化方案

参考文献

第7章 基因组DNA的突变分析

7.1 概述

7.2 实验方案

7.2.1 PCR产物单链构象多态分析

7.2.2 PCR-异源双链构象分析法

7.2.3 PCR产物直接测序

7.2.4 PCR-限制性片段长度多态性分析

7.3 相关知识

7.3.1 背景知识

7.3.2 关键因素

7.3.3 时间安排

7.3.4 预期结果

参考文献

第二部分RNA相关的操作

第8章 RNA的提取和CDNA合成

8.1 概述

8.2 组织或细胞的总RNA提取

……

第9章 寻找差异表达基因方法——SSH法

第10章 全长基因的克隆——SMART技术

第11章 Northern Blot技术

第12章 siRNA的应用

第13章 RNA酶保护实验

第三部分 蛋白质相关的操作

第14章 蛋白质分离、鉴定相关技术

第15章 染色质免疫沉淀技术(ChIP)

第16章 蛋白复合体的分离与鉴定

第17章 免疫沉淀

第18章 免疫荧光染色技术

第四部分 细胞生物学相关的操作

第19章 外源基因在原核生物中的表达

第20章 外源基因在真核细胞中的表达

第21章 转基因植物

第22章 转基因动物技术

第23章 细胞凋亡的分子生物学检测方法

附录 分子生物学实验室安全及注意事项

不同于传统的相关图书，《分子生物学实验方法与技巧》主要介绍编写者们在近20年内进行分子生物学相关实验时，具体所采用的实验方案和技巧，是实用型实验方案的汇集。本书不求“新”：不追逐目前国际上的研究热点；也不求“全”：不是分子生物学的必备手册；只求“通”和“透”：每个实验均分为概述、实验方案（一套或根据其他条件而定的多套方案）、材料试剂（器皿和试剂等）、相关知识（背景知识、关键因素、时间安排、预期结果、参考文献）等四个方面的内容，力求将每一个实验讲透。无论对于经验丰富的研究者还是初学者，本书都能给予一定的启迪。

《分子生物学实验方法与技巧》是实用型分子生物学相关实验方案的汇集。全书共分四部分二十三章，内容涉及DNA相关的操作，RNA相关的操作，蛋白质相关的操作以及细胞生物学相关的操作。无论对于经验丰富的研究者还是初学者，本书都能给予一定的启迪。