生物化学与分子生物学实验教程

第一篇基础理论

第1章基本操作与缓冲液的配制

第一节洗涤液的配制及实验用器皿的清洗

第二节常用仪器的使用

第三节溶液的混匀与过滤

第四节试剂及试剂保存与配制

第五节实验误差与提高实验准确度的方法

第2章常用的简单分离技术

第一节离心

第二节过滤

第三节浓缩

第四节沉淀

第五节透析

第3章层析技术

第一节层析的原理

第二节吸附层析

第三节排阻层析

第四节分配层析

第五节离子交换层析

第六节亲和层析

第七节气相层析

第八节高效液相层析

第4章电泳技术

第5章光谱分析技术

第6章常用的分子生物学技术

第一节核酸的分离纯化技术

第二节重组DNA技术

第三节核酸分子杂交技术

第四节PCR技术

第五节蛋白质相互作用技术原理

第六节蛋白质与DNA相互作用技术原理

第二篇实验操作

第7章物质的分离与鉴定实验

实验一氨基酸的分离鉴定(纸层析法)

实验二血红蛋白与鱼精蛋白的层析分离

实验三离子交换层析法分离超氧化物歧化酶

实验四亲和层析纯化胰蛋白酶

实验五气相层析

实验六高效液相层析

实验七血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

实验八DNA的琼脂糖凝胶电泳

实验九平板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质

实验十梯度PAGE分离血清蛋白质

实验十一SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量

实验十二血红蛋白吸收曲线的绘制

实验十三茯苓多糖和猪苓多糖水解与鉴定

实验十四肝组织中核酸的分离与鉴定

实验十五酪蛋白的制备

第8章物质定量测定实验

实验一核黄素荧光定量测定

实验二邻甲苯胺法测定血糖浓度

实验三维生素C的测定(2，4-二硝基苯肼法)

实验四用正交法测定几种因素对酶活力的影响

实验五血清总胆固醇的测定

实验六血清胆固醇测定(邻苯二甲醛法)

实验七血清三酰甘油测定

实验八血清胆红素的定量测定

实验九血清肌酐定量(苦味酸法)

实验十血清钙定量(邻甲酚酞络合剂法)

实验十一血清钾定量(四苯硼钠法)

实验十二血清尿素氮定量(二乙酰一肟法)

实验十三血浆二氧化碳结合力测定(滴定法)

实验十四蛋白质含量测定(紫外吸收法)

实验十五蛋白质含量测定(考马斯亮蓝法)

实验十六蛋白质含量测定(双缩脲法)

实验十七蛋白质含量测定(Folin-酚法)

实验十八RNA的定量测定(苔黑酚法)

实验十九还原糖和总糖含量的测定(3，5-二硝基水杨酸比色法)

实验二十糖的定量测定(蒽酮比色法)

实验二十一果胶质含量测定(重量法)

实验二十二脂肪碘值的测定

实验二十三中药杏仁脂质成分的定量测定(索氏提取法)

第9章蛋白质性质实验

实验一酶的特性

实验二茚三酮反应

实验三蛋白质等电点的测定

实验四蛋白质的沉淀反应

实验五丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的影响

实验六乳酸脱氢酶及其辅酶的作用

实验七碱性磷酸酶米氏常数测定(双倒数作图法)

实验八血清丙氨酸转氨酶的活性测定

第10章分子生物学实验

实验一从植物组织提取基因组DNA

实验二从动物组织中提取基因组DNA

实验三细菌基因组DNA的制备

实验四从琼脂糖凝胶中回收3-磷酸甘油醛脱氢酶基因片段

实验五LB、2YT液体和固体培养基的配制

实验六质粒DNA少量快速提取

实验七质粒DNA的大量提取和纯化

实验八人ATP7B基因第十三外显子的PCR

实验九肝组织总RNA的提取

实验十GAPDHmRNA的反转录PCR(RT-PCR)

实验十一利用实时定量PCR分析TNFAIPl在不同细胞系中的表达

实验十二重组质粒的连接

实验十三大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备

实验十四重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞及筛选、鉴定

实验十五重组质粒DNA的酶切

实验十六DNA印迹杂交(一)

实验十七DNA印迹杂交(二)

实验十八肝癌细胞总RNA的RNA印迹实验

实验十九蛋白质印迹实验

实验二十酵母双杂交系统确定蛋白质相互作用实验

实验二十一GST融合蛋白质沉降技术检测蛋白质相互作用实验

实验二十二免疫共沉淀实验

实验二十三电泳迁移率实验

实验二十四染色质免疫沉淀实验

　　为了使同学们能够顺利完成生物化学与分子生物学实验，了解现代生物化学与分子生物学实验最基本的技术，并在今后专业课的学习和工作中灵活应用，编者编写了本教材。　　本书主要包括基础理论和实验操作两个部分。基础理论部分包括生物化学与分子生物学的基本操作技术原理，实验操作部分包括生化物质的分离鉴定与定量测定等生物化学基本实验以及常用的分子生物学实验。　　本书系《医学基础实验系列教程》之一，包括基础理论和实验操作两大部分。基础理论部分阐述了生物化学基本操作、缓冲液配制、分离技术、层析技术、电泳技术、光谱分析技术和常用的分子生物学技术；实验操作部分介绍了物质分离鉴定、物质定量测定、蛋白质性质及常用分子生物学技术方法等70个实验，每个实验包括目的、原理、试剂与器材、操作方法、注意事项和思考题。本书内容系统，阐述简明，注重学生动手能力的培养和实验过程的科学体验，主要供高等医学院校相关专业实验教学之用，也可供相关专业的科研人员、企业技术人员阅读参考。