酶的凝胶电泳检测手册

第1章简介

参考文献

第2章酶凝胶电泳检测的基本原理

2.1显色反应

2.1.1能还原四唑盐的产物

2.1.2能与重氮盐偶联的产物

2.1.3引起pH值变化的产物

2.1.4正磷酸

2.1.5焦磷酸

2.1.6过氧化氢

2.1.7碳酸根离子

2.1.8有色产物

2.1.9带有还原型巯基的产物

2.1.10影响淀粉碘反应的产物

2.1.11聚合酶的产物

2.1.12解聚酶的产物

2.2荧光生成反应

2.2.1NADH和NADPH

2.2.24-甲基伞形酮

2.2.3形成发光镧系金属螯合物的产物

2.2.4其它

2.3放射自显影

2.4生物自显影

2.5二维凝胶光谱分析

2.6蛋白质印迹

2.6.1固定化基质

2.6.2蛋白质的转移

2.6.3特异性的抗体和标记的抗抗体

2.6.4检测印迹中被转移的蛋白质

2.7其它方法

2.7.1将不溶于水的底物掺入分离凝胶进行检测

2.7.2脂代谢酶的检测

2.7.3通过二维电泳进行检测

2.7.4用特异性探针检测酶蛋白

2.7.4.1以标记的适配体和适配体信标作为特异性探针

2.7.4.2以标记的抑制剂作为特异性探针

2.7.5一些非酶蛋白的特异性检测

2.7.5.1用反向酶谱检测蛋白酶和核酸酶的抑制蛋白

2.7.5.2以生物素标记的蛋白酶为特异性探针检测蛋白酶抑制蛋白

2.7.5.3生物素标记的乙酰透明质酸作为特异性探针检测乙酰透明质酸结合蛋白

2.7.5.4转铁蛋白

参考文献

第3章特异性酶的检测方法

3.1酶单页的结构

参考文献

3.2一般原则、评价和建议

3.2.1酶电泳和检测的支持介质的选择

3.2.1.1醋酸纤维素凝胶

3.2.1.2聚丙烯酰胺凝胶

3.2.1.3淀粉凝胶

3.2.2凝胶染色的策略

3.2.2.1酶谱方法的选择

3.2.2.2染色液的制备

3.2.2.3染色液的使用方式

3.2.2.4增强酶活性条带染色强度的方式

3.2.2.5酶谱方法的特异性和一些相关问题

3.2.3记录和保存酶谱

3.2.4节省资源的策略

3.2.4.1在同一块凝胶上同时检测几种酶

3.2.4.2在同一块凝胶上连续检测不同的酶

3.2.4.3染色液的重复使用

3.2.4.4在一块凝胶上使用几个原点

3.2.4.5用电印迹法对电泳凝胶进行多次复制

3.2.4.6使用半制备凝胶产生连接酶制备物

3.2.5疑难解答

3.2.6安全规则

参考文献

3.3酶单页酶单页中常用的缩写附录

附录

附录A-1Escherichiacoli的基本培养基

附录A-2Pediococcuscerevisiae的柠檬酸盐培养基

附录B-1酶的目录（中文）

附录B-2酶的目录（英文）

附录C酶的电泳所用的缓冲系统

附录D非常用化合物中英文名称对照

　　《酶的凝胶电泳检测手册》为我们展现了酶的凝胶电泳分析方法在生物学和医学领域的广泛适用性和简便可行性，本书还介绍了400多种不同酶的各种特异性检测方法。《酶的凝胶电泳检测手册》对于研究蛋白质和酶的专业科技人员是一本难得的、具有很好参考价值的工具书。　　凝胶电泳是生命科学实验、临床诊断等场合中检验酶的最常用的方法之一。本手册是国际上酶检测技术方面权威的工具书之一，其中的一些检测方法被国内外很多实验室所沿用。　　本手册在扼要介绍酶凝胶电泳检测技术的一般原理和方法的基础上，着重讲述了：400多种酶的900多种检测方法；每一种酶以“酶单页”的形式讲解，一目了然；酶单页中，在电泳方法的介绍方面选取了醋酸纤维素凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和淀粉凝胶三种主要支持介质，提供了缓冲液的配制以及问题的解决方案；酶单页按照酶的EC编号排列，附录部分列出了酶的中英文目录，方便读者查阅。　　作为一本难得的案头工具书，本手册的读者既包括生命科学相关学科的研究人员，也涵盖医学、农学等领域的专业工作者。【作者简介】　　G.P.曼琴科（GennadyP.Manchenko）博士是俄罗斯海参崴科学院海洋生物学院遗传学实验室的高级研究员。Manchenko博士1973年毕业于新西伯利亚大学，获细胞遗传学博士学位。1973年进入海参崴的海洋生物学院，1975年晋升为副研究员。1981年在列宁格勒大学获得博士学位。1983年起被聘为海参海洋生物学院遗传学实验室的高级研究员。Manchenko博士是美国遗传学会1978～1983年的会员，俄罗斯瓦维洛夫（Vavilov）遗传学和畜牧学学会会员，海参崴海洋生物学院科学委员会成员。他曾经获得来自乔治.索罗斯（GeorgeSoros）基金、尤金.加菲尔德（EugeneGarfield）基金、国际科学基金和俄罗斯研究基金的研究支持。目前的研究兴趣集中在同工酶学理论和应用方面。