临床分子生物学检验技术实验指导

第一部分 分子生物学检验技术实验室

一、分子生物学检验技术实验须知

二、分子生物学检验技术实验室介绍

三、分子生物学检验技术常用仪器介绍

四、分子生物学实验室生物安全

第二部分 核酸的分离与纯化

实验1 真核基因组DNA的分离与纯化

实验2 真核细胞mRNA的分离与纯化

实验3 质粒DNA的提取

实验4 核酸的鉴定

第三部分 核酸扩增技术

实验5 聚合酶链反应

实验6 PCR-RF1P检测线粒体DNAA3243G异质性突变

实验7 等位基因特异性扩增法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

实验8 TRAP一银染法检测端粒酶活性

实验9 多重PCR检测测a-地中海贫血基因缺失

实验10 PCR-SSCP检测苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶基因外显子7突变

实验11 实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒（HBv）核酸

实验12 逆转录．聚合酶链反应检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA

第四部分 核酸分子杂交技术

实验13 探针的制备

实验14 DNA分子杂交

实验15 RNA分子杂交

实验16 荧光原位杂交

实验17 反向斑点杂交法检测B-地中海贫血

第五部分 分子克隆技术

实验18 DNA的限制性内切酶酶切反应

实验19 目的片段的连接

实验20 感受态细胞的制备及重组子转化

实验21 重组子的鉴定

第六部分 其他分子检验技术

实验22 真核细胞基因转染技术

实验23 Western印迹

实验24 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验25 H1A基因分型

实验26 乙型肝炎病毒基因分型(芯片法)

实验27 PCR-荧光探针法检测CYP2C19基因多态性

第七部分 创新性实验、设计性实验及综合性实验

实验28 采用导流杂交基因芯片技术进行人乳头瘤病毒基因分型

实验29 采用多重连接依赖探针扩增技术检测抗肌萎缩蛋白基因突变

实验30 人肝癌相关microRNA一21的定量检测

实验31 荧光素酶报告基因的制备

实验32 基因重组

附录 分子生物学检验技术实验中常用试剂和缓冲液的配制

《临床分子生物学检验技术实验指导》包括32个实验，内容分为七大部分：分子生物学检验技术实验室介绍；核酸的分离与纯化；核酸扩增技术；核酸分子杂交技术；分子克隆技术；其他分子检验技术；创新性实验、设计性实验及综合性实验。各校可根据自身条件、要求的不同进行取舍和组合，建议实验教学时数为30-60学时。
　　《临床分子生物学检验技术实验指导》具有以下特点：①注重基础知识和技能的训练，从微量移液器的使用到分子生物学实验室的规范操作及基本实验，从试剂配制到具体操作，力求详细，方便教学；②加强有临床应用价值或应用前景的技术及项目的介绍，如PCR技术、基因突变的检测等；③增加刨新性实验、设计性实验及综合性实验，增强对学生创新能力和综合素质的培养。有些综合性、设计性实验来自科研课题，内容新、方法先进，有利于学生掌握新知识、新技术。