生物化学与分子生物学实验指导

第一篇生物化学与分子生物学实验基本技术

第一章生物化学实验基本操作

第一节实验室规则

第二节基本实验操作

一、玻璃仪器的清洗

二、玻璃仪器的干燥

三、特殊污物的清洗

四、塑料器皿的清洗

五、刻度吸管的使用

六、可调式微量移液器的使用

七、溶液的混匀、加热、保温及冷却

第三节常用实验仪器的使用

一、LD5-2A离心机的使用方法

二、722型分光光度计的使用方法

三、752紫外光栅分光光度计的使用方法

第四节常用实验标本的制备

一、血液样本的收集

二、尿液样本的收集与保存

三、组织样品的制备

第五节实验报告的书写

一、实验报告基本格式

二、书写实验报告应注意事项

第二章分光光度技术

第一节基本原理

一、光的一般知识

二、发射光谱与吸收光谱

三、朗伯-比尔定律

第二节分光光度计的结构

一、光源

二、分光系统

三、狭缝

四、吸收池

五、检测系统

第三节分光光度技术的应用

一、用于溶液中物质的定量测定

二、用于溶液中物质的定性测定

第三章电泳技术

第一节基本原理

一、电泳的概念

二、电泳的主要影响因素

第二节电泳的分类

一、按分离目的分类

二、按分离原理分类

三、按支持介质分类

四、其他分类

第三节常用电泳技术

一、纸电泳

二、醋酸纤维素薄膜电泳

三、琼脂糖凝肢电泳

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳

五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

六、等电聚焦电泳

七、双向电泳

八、毛细管电泳

九、特殊电泳

第四章层析技术

第一节基本知识

一、层析的基本概念

二、层析技术的分类

三、层析的基本原理

第二节离子交换层析

一、基本原理

二、离子交换介质

三、分离过程

四、离子交换层析的应用

第三节凝胶层析

一、基本原理

二、常用凝胶

三、凝胶层析的应用

第四节亲和层析

一、基本原理

二、基质与配体的选择

第五节高效液相色谱

一、基本概念

二、基本装置

第五章离心技术

第一节基本原理

一、离心力

二、相对离心力

三、沉降系数

第二节离心机的类型

一、制备性离心机

二、分析性离心机

第三节制备性超速离心的分离方法

一、差速沉降离心法

二、速度区带离心

三、等密度离心

第四节离心操作的注意事项

第六章透析技术

第一节透析原理及影响因素

第二节透析技术的应用

第三节透析操作及注意事项

第七章生物大分子制备

第一节细胞破碎及细胞器分离

一、细胞破碎

二、细胞器分离

第二节生物大分子的分离与纯化

一、蛋白质(酶)的分离与纯化

二、核酸的分离与纯化

第三节提纯后的处理

一、样品的浓缩

二、样品的干燥及贮存

第八章分子生物学基本技术原理

第一节核酸分子杂交

一、核酸分子杂交的基本理论

二、核酸分子探针

三、核酸分子杂交的种类与方法

第二节DNA克隆技术基本原理

一、获取目的基因

二、构建基因载体

三、限制性内切核酸酶的作用

四、DNA分子重组

五、重组DNA分子导入宿主细胞

六、阳性重组体的筛选和鉴定

七、克隆基因的表达

第三节聚合酶链反应

一、基本原理与方法

二、PCR技术的应用

第二篇生物化学与分子生物学教学实验

第九章基本理论实验

实验一蛋白质的沉淀、变性及等电点的测定

一、蛋白质的沉淀与变性

二、蛋白质等电点的测定

实验二理化因素对唾液淀粉酶活性的影响

实验三琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

实验四脂肪酸的β-氧化作用酮体的生成和利用

实验五血清丙氨酸氨基转移酶活性测定(赖氏法)

第十章基本技术实验

实验六蛋白质的透析

实验七蛋白质的定量测定(一)：酚试剂法(Lowry法)

实验八蛋白质的定量测定(二)：紫外分光光度法

实验九血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

实验十血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

实验十一SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量

实验十二肌肉组织氨基移换作用(纸层析法)

实验十三胡萝卜素的柱层析分离

实验十四细胞核的分离与纯化

第十一章综合强化实验

实验十五激素对血糖浓度的影响

一、血糖的定量测定葡萄糖氧化酶法

二、胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响

实验十六血清广球蛋白的分离、纯化及鉴定

实验十七核酸的制备及测定

第十二章分子克隆技术基础实验

实验十八质粒DNA的提取(碱裂解法)

实验十九限制性核酸内切酶对质粒DNA的酶切作用

实验二十DNA的琼脂糖凝胶电泳

实验二十一感受态细菌的制备及质粒DNA的转化

实验二十二核酸的分子杂交

实验二十三聚合酶链反应体外扩增DNA(PCR)

第十三章学生设计性实验

第一节设计性实验概述

一、设计性实验的概念

二、医学科学研究的类型和医学实验的要素

三、学生设计性实验的基本程序

第二节设计性实验的选题和设计

一、设计性实验的选题

二、实验设计

第三节数据的记录与处理

一、实验研究的观察记录

二、实验数据的处理

第四节实验报告和论文的撰写

一、实验报告的撰写

二、科研论文撰写

第五节设计性实验教学组织案例

第三篇生物化学与分子生物学常用资料及数据

第十四章化学试剂分级及注意事项

第一节一般化学试剂的分级

一、化学试剂的分级

二、易变质及需要特殊方法保存的试剂

第二节试剂配制的一般注意事项

第十五章常用试剂配制

第一节生物化学与分子生物学实验中常用试剂的配制

一、有机试剂的配制

二、细菌培养基和抗生素的配制

三、生化实验中常用缓冲液配制

四、常用电泳缓冲液

五、常用凝胶上样缓冲液的配制

六、常用贮存液的配制

七、细菌的保存

第二节重铬酸洗液的配制与再生

附录常用的生物化学与分子生物学相关网站

一、国内网站

二、国外网站

参考文献

　　本书是“高等医药院校实验课程教材”之一，全书共分15个章节，对生物化学与分子生物学实验作了指导，具体内容包括生物化学实验基本操作、分光光度技术、电泳技术、生物大分子制备、分子生物学基本技术原理、基本技术实验等。该书可供各大专院校作为教材使用，也可供从事相关工作的人员作为参考用书使用。