生物化学与分子生物学实验

概述

第一篇基础性实验

第一章生物化学与分子生物学实验基本操作

第二章分光光度法

实验一血清蛋白质含量测定

实验二DNA及RNA含量测定

实验三血糖浓度测定

实验四血清三酰甘油测定

实验五血清总胆固醇含量的测定

实验六血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定

第三章层析技术

实验七聚酰胺薄膜层析技术蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法

实验八凝胶层析(分子筛层析法)分离蛋白质

实验九离子交换层析分离氨基酸

实验十亲和层析纯化血清IgG

第四章电泳技术

实验十一血清蛋白乙酸纤维素薄膜电泳

实验十二聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白

实验十三聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清LDH

实验十四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定蛋白质分子量

实验十五等电聚焦-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳(IEF-PAGE)测定蛋白质等电点

实验十六DNA琼脂糖凝胶电泳

第五章印迹技术

实验十七Southern印迹

实验十八Northern印迹

实验十九Western印迹

实验二十非放射性Dig-dUTP标记DNA探针及杂交检测

第二篇综合性实验

第六章蛋白质定量分析方法学比较

实验二十一Lowry改良法测定蛋白质浓度

实验二十二考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质浓度

实验二十三BCA(二喹啉甲酸)法测定蛋白质浓度

实验二十四紫外分光光度法测定蛋白质浓度

第七章酶分离纯化与动力学分析

实验二十五碱性磷酸酶分离纯化及比活性测定

实验二十六碱性磷酸酶初速度的测定

实验二十七碱性磷酸酶Km值测定

实验二十八pH、温度及抑制剂对碱性磷酸酶活性的影响

第八章DNA提取、扩增与测序

实验二十九质粒DNA的提取

实验三十基因组DNA的提取

实验三十一聚合酶链反应(PCR)

实验三十二DNA序列测定

第九章RNA提取与鉴定

实验三十三细胞RNA的提取

实验三十四逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)

实验三十五荧光定量PCR

第十章基因克隆

实验三十六目的基因与质粒的限制性内切酶消化

实验三十七目的基因与质粒DNA的连接

实验三十八质粒DNA的转化和筛选

第三篇研究性实验

实验三十九胰岛素和肾上腺素对血糖和肝糖原的影响

实验四十血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定

实验四十一青豌豆素的分离纯化及其鉴定

实验四十二外源基因在原核细胞的表达

实验四十三蛋白质与DNA的相互作用分析

参考文献

附录

　　本书将实验技术分为基础性实验、综合性实验和研究性实验三部分。①基础性实验：介绍最基本的实验操作和技能；②综合性实验：选择及重组实验，从多层次、整体介绍实验技术和方法；③研究性实验：开展以学生为主体的初步科学研究实验，将研究方法引入实验过程。本教材以培养学生的三基为基础，同时注重提高学生的创新能力和综合素质，通过整合实验，开展综合性、研究性实验，以扩展学生的科研思维能力，提高分析和处理问题的能力。　　本教材涵盖了生物化学与分子生物学的基本实验方法和技术，是学习生物化学与分子生物学实验技术独立课程的一本实用教材。该书面向医学本专科、硕士研究生各专业学生，适用于四、五年制临床医学、非临床医学各专业、七年制临床医学的实验教学，同时也可作为医学专业研究生学习生物化学与分子生物学实验技术的参考。　　本书共分三篇：第一篇为基础性实验，共五章，包括实验基本操作、分光光度法、层析技术、电泳技术、印迹技术等生物化学与分子生物学实验中最基本的实验技能；第二篇为综合性实验，共五章，包括蛋白质定量分析方法学(Lowry改良法、考马斯亮蓝法等)，酶分离纯化与动力学分析，DNA提取、扩增与测序，RNA提取与鉴定以及基因克隆等，通过综合性实验介绍实验技术方法的应用；第三篇为研究性实验，包括胰岛素和肾上腺素对血糖和肝糖原的影响、血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定、青豌豆素的分离纯化及其鉴定、外源基因在原核细胞的表达及蛋白质与DNA的相互作用分析等。书中在阐明各类方法之基本原理的同时，注重实验的具体操作和实例的应用。　　本书适用于四、五年制临床医学、非临床医学各专业、七年制临床医学的实验教学，也可作为医学专科、硕士研究生各专业学生的实验教材，同时也供非医学专业学生学习生物化学与分子生物学技术的参考。