生物化学技术实验指导

第一部分生物化学技术原理

一、实验记录与实验报告的书写

二、实验室基本操作

(一)玻璃仪器的洗涤与清洁

(二)塑料器皿的清洗

(三)清洗液的原理与配制

(四)量器类的使用法

(五)过滤方法

(六)试管及离心管中液体的混匀操作

三、几种常规仪器的使用

(一)分光光度计

(二)电子天平

(三)干燥箱和恒温箱

(四)电热恒温水浴

(五)离心机

四、生物大分子的制备及鉴定

(一)盐析技术

(二)透析和超滤

(三)减压浓缩和冷冻干燥

五、层析技术

(一)吸附层析

(二)分配层析

(三)离子交换层析

(四)凝胶过滤层析

(五)亲和层析

六、电泳技术

(一)基本原理

(二)影响泳动率的因素

(三)电泳技术的种类

第二部分生物化学实验

第一节基本实验

实验一苯酚一硫酸法测定水溶性多糖

实验二氨基酸纸上层析

实验三糖的硅胶G薄层层析

实验四磷脂的分离与鉴定薄层层析法

实验五甲醛滴定法定量测定氨基酸

实验六蛋白质的两性反应和等电点的测定

实验七蛋白质浓度的测定

实验八微量凯氏定氮法测总蛋白氮

实验九核酸的定量测定

实验十维生素C的定量测定2，6-二氯酚靛酚滴定法

第二节综合性实验

实验一蔗糖酶的提取及初提纯

实验二蔗糖酶的纯化QSepharose-柱层析法

实验三蔗糖酶活力的测定

实验四蔗糖酶蛋白质含量测定及比活力计算

实验五SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量

实验六蔗糖酶的固定化及活力测定

第三节选择性实验

实验一底物浓度对酶促反应速度的影响米氏常数的测定

实验二酶的特异性、温度、pH及激活剂对酶活性的影响

实验三大豆总异黄酮的提取及含量测定

实验四类胡萝卜素的色层分析及鉴定

实验五组织DNA的提取及定量测定

实验六DNA琼脂糖凝胶电泳

实验七纸电泳法定量分析腺苷三磷酸

实验八葡聚糖凝胶层析法测定蛋白质的分子量

实验九酶联免疫吸附实验(ELISA)测定乳汁中孕酮含量

实验十血清蛋白质的层析分离血清广球蛋白的分离纯化(分子筛层析法)

实验十一血清蛋白质的电泳分离醋酸纤维素薄膜电泳

实验十二脲酶的凝胶过滤分离纯化

实验十三血清蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳

实验十四肝糖原的提取和定量

实验十五蛋白质印迹分析

实验十六单向定量免疫电泳

附录

一、生物化学实验室规则

二、实验室安全及防护知识

三、常用数据表

参考文献

　　本书由生物化学技术原理、生物化学实验和附录三部分组成。生物化学技术原理部分重点介绍常规的实验室技术，内容尽可能地简洁扼要。生物化学实验部分除了一些生物化学基础实验外，还突出了有关酶的综合大实验及免疫化学实验的内容，由基本实验、综合性实验和选择性实验三大模块组成，其中既保留了一些旨在加强学生基本实验方法和技能训练的传统实验，也引进了一些新近发展起来的生物化学实验技术。旨在培养学生的动手能力和良好的科研素质，培养学生科研思维和独立开展研究工作的能力。