细胞工程实验指导

实验计划

第1章 动物细胞培养技术

1-1 动物细胞培养实验的器材准备

1-2 动物细胞培养用液的配制及过滤除菌

1-3 培养细胞的形态观察、大小测定和照相记录

1-4 动物细胞的传代培养

1-5 动物细胞的原代培养

1-6 培养细胞的分裂指数和生长曲线测定

1-7 培养细胞的活性测定

1-8 培养细胞的染色体标本制备与分带技术

1-9 培养细胞的超低温冻存与复苏

第2章 杂交瘤技术与单克隆抗体制备

2-1 抗原制备与小鼠免疫

2-2 饲养层细胞的制备

2-3 骨髓瘤细胞的制备

2-4 免疫脾细胞的制备

2-5 细胞融合和杂交瘤筛选

2-6 特异性单克隆抗体的检测

2-7 杂交瘤细胞的克隆化培养（有限稀释法）

2-8 单克隆抗体的制备与分离纯化

2-9 杂交瘤细胞的保存

第3章 小鼠胚胎干细胞体外培养和分化技术

3-1 小鼠超数排卵

3-2 小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层的制备

3-3 小鼠胚胎干细胞（mESC）的分离培养与传代

3-4 小鼠胚胎干细胞（mESC）的鉴定

3-5 小鼠胚胎干细胞的体外分化实验

3-6 诱导多潜能干细胞（iPSC）的制备

第4章 植物组织与细胞培养技术

4-1 植物组织与细胞培养基的配制

4-2 胡萝卜愈伤组织诱导及继代培养

4-3 胡萝卜愈伤组织的“器官分化”与“体细胞胚发生”

4-4 马铃薯茎尖培养

4-5 胡萝卜悬浮细胞培养

4-6 胡萝卜人工种子制作

4-7 大麦原生质体的分离与电融合

第5章 真核细胞转基因技术和检测技术

5-1 磷酸钙沉淀介导的转基因技术

5-2 阳离子聚合物介导的转基因技术

5-3 脂质体介导的转基因技术

5-4 基因枪法介导的转基因技术

5-5 细胞拆合和细胞重组

5-6 流式细胞仪分析技术

5-7 激光扫描共聚焦显微镜的使用和观察

5-8 细胞凋亡的诱导及生化检测

附录1 缩略词表

附录2 常用培养基和试剂的配制

附录3 常用实验仪器

参考书目

《细胞工程实验》分5章共39个实验，以动物细胞培养为基础，以单克隆抗体制备的技术体系为主要内容，包括骨髓瘤细胞培养、小鼠免疫、细胞融合、克隆筛选、抗体检测和细胞冻存等，以真核细胞转基因技术、小鼠胚胎干细胞培养和iPSC诱导技术、流式细胞仪分析技术和激光扫描共聚焦显微镜技术等为延伸，并包括植物细胞工程的主体技术。由于该类实验主要是以活细胞为操作对象，要求实验的连贯性，所以比较适合集中安排课时，各校在具体教学中也可根据自身情况酌情调整。 本实验教材为生物技术专业技能训练设计，提供了一个先进、实用、系统而又可供选择的实验体系；适用于生物类各本科专业细胞工程实验教学，也可用于生物相关专业的研究生实验技能训练以及生物专科学校的高级技能强化训练。