基因修饰小鼠制备常用技术

第1章 基因修饰动物概述

1.1 基因修饰动物的概念

1.1.1 转基因动物

1.1.2 基因敲除

1.1.3 基因捕获

1.1.4 其他理化因素引起的基因组修饰与基因修饰的区别

1.2 转基因动物的命名

1.2.1 转基因动物

1.2.2 基因敲除／敲人动物

1.2.3 条件性敲除小鼠的命名原则

1.2.4 基因捕获突变动物的命名原则

1.2.5 对携带遗传操作实体的品系和原种的命名规则

1.3 基因修饰动物技术的价值

1.3.1 使用小鼠做基因修饰研究的原因

1.3.2 基因修饰动物模型与细胞模型的区别

1.4 基因修饰的伦理学

1.4.1 基因修饰对动物的危害

1.4.2 环境和社会安全问题

1.4.3 基因修饰动物涉及的伦理学问题

1.5 基因修饰动物制备原理

1.5.1 生殖生物学原理

1.5.2 胚胎工程技术原理

1.5.3 基因修饰技术原理与进展

1.6 基因修饰技术发展趋势

第2章 原核注射法制备转基因小鼠

2.1 转基因载体的构建

2.1.1 目的基因序列优化设计与克隆

2.1.2 侧翼非翻译序列（UTR）和PolyA信号

2.1.3 选择合适的启动子

2.1.4 目的基因的连接

2.1.5 质粒载体的选择

2.1.6 注射前质粒的酶切与纯化

2.2 动物的准备

2.2.1 动物选择

2.2.2 超数排卵与卵的收集

2.3 原核注射

2.3.1 显微注射工作站

2.3.2 显微注射前的准备

2.3.3 显微注射

2.4 胚胎移植

2.4.1 输卵管移植

2.4.2 子宫角移植

2.5 阳性转基因小鼠检测

2.5.1 染色体水平的检测

2.5.2 转录水平的检测

2.5.3 翻译水平的检测

2.5.4 转基因小鼠整体表型观察

2.5.5 常规方法简介

2.6 讨论

2.6.1 转基因的总体效率

2.6.2 转基因在小鼠体内的整合及表达效率分析

第3章 基因敲除小鼠制备

3.1 载体构建

3.1.1 载体设计原则

3.1.2 筛选阳性细胞克隆的策略

3.1.3 载体的克隆

3.2 胚胎干细胞

3.2.1 ESC体外培养

3.2.2 同源重组ESC的鉴别

……

第4章 条件性基因敲除

第5章 基因捕获

第6章 CRISPR/Cas和TALEN系统敲除

第7章 基因修饰小鼠繁育和保种

基因修饰小鼠是目前生物医学研究中最重要的实验动物模型之一。30多年来，对基因修饰小鼠的开发和利用极大地促进了我们对哺乳动物基因功能和发育程式的研究以及对人类疾病发病机制的认识，也保障了新药的开发进程。《基因修饰小鼠制备常用技术》系统地介绍了小鼠转基因和基因敲除的常规技术以及最新研究进展，以期使更多生物医学领域的学生和科研人员能学习和使用这些技术，并充分利用日益丰富的基因修饰小鼠资源，促进科学研究的发展。《基因修饰小鼠制备常用技术》可供从事生物学、医学、药学和农学等学科教学、研究以及生物技术管理人员参考使用。