生物化学与分子生物学实验技术

实验室规则 1

实验记录及实验报告 2

生物化学实验 4

实验一　缓冲液配制和pH值测定 4

实验二　分光光度计线性分辨范围测定 6

实验三　3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量 8

实验四　RNA的提取与核酸的颜色反应 14

实验五　影响淀粉酶活性的一些因素 18

实验六　硫酸铵沉降法纯化工业淀粉酶 22

实验七　葡聚糖凝胶色谱法脱盐 24

实验八　淀粉酶活力的测定 28

实验九　Folin-酚比色法测定蛋白质含量 31

实验十　间隔法测定过氧化物酶的活力 35

实验十一　连续记录法测定过氧化氢酶的活力 37

实验十二　2,6-二氯酚靛酚滴定法测定L-抗坏血酸的含量 39

实验十三　荧光光度法测定核黄素的含量 42

实验十四　茚三酮比色法测定赖氨酸含量 45

实验十五　考马斯亮蓝G-250比色法测定蛋白质含量 48

实验十六　纸电泳分离鉴定三种腺苷酸 52

实验十七　醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 53

实验十八　NBT光化还原法测定超氧化物歧化酶活性 56

实验十九　Eadie-Hofstee法测定辣根过氧化物酶的Km 58

实验二十　硫酸铵分级沉淀纯化苯丙氨酸解氨酶 60

实验二十一　凝胶色谱法脱去PAL溶液中的硫酸铵 66

实验二十二　DEAE纤维素柱色谱法纯化PAL 70

实验二十三　超氧化物歧化酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 72

实验二十四　过氧化物酶同工酶的分析——等电聚焦电泳 76

实验二十五　过氧化氢酶和辣根过氧化物酶的色谱分离与电泳 80

实验二十六　1, 5-二磷酸核酮糖羧化酶加氧酶提取及其Western杂交检测 84

分子生物学实验 88

实验二十七　用16S rDNA方法鉴定细菌种属 88

实验二十八　植物基因组DNA的提取、纯化与定量 90

实验二十九　DNA琼脂糖凝胶电泳 93

实验三十　基因组DNA的酶切与检测 95

实验三十一　质粒DNA的提取、纯化与鉴定 96

实验三十二　目的基因PCR扩增 99

实验三十三　感受态细胞的制备及转化 101

实验三十四　DNA测序 103

实验三十五　重组子的构建、筛选与鉴定 105

实验三十六　植物总RNA的提取、纯化与检测 109

自行设计实验 111

实验三十七　工业淀粉酶的纯化与分析 111

综合性开放实验 112

附录 113

附录一　植物样品的采取、处理与保存 113

附录二　常用缓冲溶液的配制 115

附录三　硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 122

附录四　色谱显色剂 123

附录五　常用凝胶及色谱用滤纸的规格和性能 127

附录六　玻璃仪器的洗涤及一些常用洗涤剂 129

附录七　移液器的使用 131

附录八　分光光度计 132

附录九　离心机 140

附录十　电泳设备 144

附录十一　pH计 148

附录十二　电子天平 150

附录十三　EDC-810型PCR仪 150

附录十四　实验室安全及防护知识 152

生物化学实验习题 155

生物化学实验习题参考答案 170

本书由实验和附录两部分组成。实验部分着重介绍了37个综合性、实用性强的生物类实验，分为生物化学实验和分子生物学实验两大部分。本教材凝聚了资深教师数十年实验教学的经验和体会，实验的设计和操作更为科学、严谨，更易于学生学习掌握。本版教材在前两版内容的基础上，对每一实验都增加了详细的实验操作技术指导，在实验教学中获得了良好效果。
在附录中整理和翻译了有关“常用仪器性能指标及使用说明”、“常用缓冲溶液的配制”、“植物样品的采集、处理与保存”等内容。此外，还补充了一些生化实验方面的习题。
本教材可供理工科高等院校的生命科学、生物技术、生物工程及农林院校的农学、林学、植保、资源环境、园艺、食品、理学等各专业的学生及相关领域的科技人员使用。