流式细胞术原理与应用教程

第一章流式细胞仪基本结构与工作原理

第一节流式细胞术发展简史

第二节流式细胞仪的基本结构

一、流式细胞仪分类

二、流式细胞仪的基本结构

第三节流式细胞仪的工作原理

一、流式细胞仪的分析原理

二、流式细胞仪的分选原理

第四节流式细胞仪的光信号检测

一、散射光信号检测

二、荧光信号检测

第五节FCM常用荧光染料

一、单克隆抗体标记的荧光染料

二、核酸荧光染料

第六节FCM的主要技术指标

一、荧光分辨率

二、荧光测量灵敏度

三、前向散射光检测灵敏度

四、FCM分析速度

五、FCM分选指标

六、其他软指标

第七节FCM仪器校正和维护与保养方法

一、FCM仪器校准

二、FCM仪器维护与保养方法

第二章流式细胞术的数据采集与分析

第一节流式细胞术的数据显示方法

一、单参数直方图

二、散点图

三、等高图

四、密度图

五、假三维图

六、三维图

七、多参数组合分析

第二节流式细胞术数据采集与分析方法

一、CellQuest软件主界面

二、流式细胞术的数据采集方法

三、流式细胞术的数据分析方法

第三章流式细胞术的样品制备方法

第一节单细胞悬液的制备

一、新鲜实体组织单细胞悬液制备

二、石蜡包埋组织单细胞悬液制备

三、培养细胞的单细胞悬液制备

四、外周血单细胞悬液制备

五、骨髓有核细胞悬液的制备

六、活检、内镜取材标本单细胞悬液制备

七、脱落细胞的单细胞悬液制备

第二节荧光抗体的选择与使用原则

一、根据信噪比选择抗体滴度，低表达抗原标记高信噪比荧光素

二、多色分析时组合抗体的使用原则

三、根据仪器型号和抗原表达强弱合理选择荧光抗体

第三节样品的荧光素标记与影响因素

一、荧光抗体直接标记法

二、荧光抗体间接标记法

三、样品荧光素标记影响因素

第四节FCM检测样品对照的设置

一、阳性对照

二、阴性对照

三、补偿对照

第五节样品的固定与保存

一、固定剂的作用

二、固定方法

第四章流式细胞术的应用

第一节FCM在临床医学中应用

一、淋巴细胞亚群分析

二、血小板分析

三、网织红细胞分析

四、白血病和淋巴瘤免疫分型

五、HLA-B27表型分析

六、PNH诊断

七、人类同种异体器官移植中的应用

八、艾滋病的诊断与治疗

九、临床肿瘤学中的应用

十、临床微生物学中的应用

第二节FCM在基础研究中的应用

一、DNA分析

二、细胞凋亡分析

三、树突状细胞(De)研究

四、造血干／祖细胞研究

五、细胞膜电位测定

六、胞内钙离子测定

七、细胞内pH测定

八、细胞内活性氧检测

九、蛋白质磷酸化检测

十、染色体分析

十一、精液质量检测

十二、flow-FISH法测定端粒长度

十三、肿瘤多药耐药性检测

十四、人类调节性T细胞检测

十五、细胞因子检测

第三节流式细胞术在海洋生物中应用

一、FCM在海洋浮游植物研究中的应用

二、FCM在海洋细菌研究中的应用

三、FCM在海洋经济动物细胞核研究中的应用

第四节FCM分选技术应用与注意事项

一、分选应用

二、分选注意事项

第五节定量流式细胞术与应用

一、校准微球

二、定量流式细胞分析方法

三、定量流式细胞术的应用

第六节流式微球捕获芯片技术(CBA方法)

一、CBA工作原理

二、CBA特点

三、所需试剂与仪器

四、主要实验步骤

五、CBAFlexSet试剂组合

第五章流式细胞术的优越性、发展趋势与展望

一、流式细胞术的优越性

二、流式细胞术的发展趋势

三、展望

第六章流式细胞术常用实验方法和注意事项

第一节流式细胞术常用试剂

一、4％多聚甲醛的配制

二、PBS配制

三、溶血剂的使用

四、破膜剂的使用

第二节流式细胞术常用实验

实验一外周血淋巴细胞亚群测定(CD系列)

一、原理

二、样本采集与处理

三、样本制备

四、结果分析

实验二激活的淋巴细胞内细胞因子的检测

一、简介

二、检测方法

实验三细胞凋亡检测

一、碘化丙啶单染法

二、AnnexinV／PI双染色法

三、(2aspase-3活性检测法

四、DNA断裂点标记

五、凋亡相关蛋白检测

实验四细胞周期与DNA倍体分析

一、原理

二、试剂配制和实验步骤

三、结果判定

四、注意事项

实验五液相中细胞因子的(2BA方法检测

一、流式微球捕获芯片技术(CytometricBeadsArray，CBA)

二、CBAFlexset检测方法

实验六细胞RNA含量测定

一、原理

二、试剂

三、染色步骤

四、检测分析

实验七细胞总蛋白质含量测定

一、原理

二、样品制备

三、检测分析

实验八网织红细胞分析

一、原理

二、样品制备

三、检测分析

实验九外周血白细胞HLA-B27抗原分析

一、原理

二、样品制备

三、检测分析

实验十血小板膜糖蛋白分析

一、原理

二、样品制备

三、检测分析

参考文献

附录1商品化流式细胞仪概述

一、美国BD公司生产流式细胞仪

二、美国Coulter公司生产流式细胞仪

附录2流式细胞术应用实例彩色图谱

　　本书重点介绍了流式细胞仪主要内部结构、分析和分选原理、数据获取和分析方法、仪器的维护方法与注意事项、实验室常规样本制备方法，同时较全面地介绍了目前该项技术在科研和临床中广泛应用领域，以及最前沿的应用和发展动态，还介绍了流式细胞术常用试剂配制、常用实验技术的操作步骤和注意事项、流式细胞术应用实例彩色图谱，最后介绍了目前市场上畅销的美国BD公司和库尔特公司的不同配置型号流式细胞仪。该书的内容丰富，涉及面广，非常适合于做研究生和本科生教材，同时也可做从事流式细胞术的科研人员和专业技术人员参考书。