细胞抗病毒天然免疫信号转导的调控机制

第一章 研究背景

第一节 天然免疫对病原微生物的识别

一、天然免疫概述

二、天然免疫的模式识别受体

第二节 抗病毒天然免疫的信号转导及其调控机制

一、抗病毒天然免疫信号转导概述

二、I型干扰素基因转录调控机制

三、模式识别受体介导的天然免疫信号转导

四、模式识别受体介导的信号转导的调控机制

第三节 病毒诱导I型干扰素表达的早、晚期事件和干扰素效应因子

一、病毒诱导I型干扰素基因表达的早、晚期事件

二、干扰素诱导的效应因子

第二章 实验材料和实验方法

第一节 实验材料

一、细胞系、细胞培养和细胞因子

二、病毒

三、抗体

四、表达载体

五、核酸操作及检测试剂盒

六、其他试剂

七、耗材

八、特殊仪器和设备

第二节 实验方法

一、表达载体构建和质粒纯化

二、细胞培养和瞬时转染

三、原代细胞的分离培养和转染

四、荧光素酶报告基因实验

五、蛋白复合物的纯化和质谱鉴定

六、免疫共沉淀和WesternBlot检测

七、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

八、RT-PCR

九、VSV空斑实验

十、体外结合核酸实验

十一、通过逆转录病毒载体构建稳定表达细胞系

十二、细胞核质分离和亚细胞器分离

十三、免疫荧光和激光共聚焦显微镜观察

第三章 实验结果和讨论一：新型核酸受体LSM14A的鉴定及其功能研究

第一节 研究背景与立项依据概述

第二节 实验结果

一、基因库筛选

二、过量表达LSM14A激活ISRE、NF-KB和IFN-B启动子

三、下调内源性LSM14A表达抑制病毒感染诱导的I型干扰素表达

四、LSM14A参与细胞抗病毒反应

五、LSMl4A参与SeV感染早期I型干扰素的表达

六、人肠癌HCT116细胞LSM14A-Flag-Knock-in细胞系的构建

七、LSM14A定位于细胞质

八、LSM14A结合poly（I：C）和poly（dA：dT）

九、LSM14A与RIG-I、VISA相互作用

十、LSM14A介导I型干扰素表达需要RIG-I的参与

十一、LSM14A、RIG-I、VISA与P-bodies的共定位

第三节 小结和讨论

第四章 实验结果和讨论二：ISG56负反馈调节病毒感染诱导I型干扰素表达

第一节 研究背景与立项依据概述

第二节 实验结果

一、ISG56和ISG54是MITA相互作用蛋白

二、过量表达ISG56抑制病毒诱导的ISRE和IFN-B的激活

三、内源性IS（356的表达下调促进病毒感染诱导的IFN-B激活

四、ISG56负调控细胞抗病毒反应

五、ISG56阻断MITA-VISA和MITA-TBK1的相互作用

第三节 小结和讨论

第五章 研究总结和展望

参考文献

缩略词表

致谢

《武汉大学优秀博士学位论文文库：细胞抗病毒天然免疫信号转导的调控机制》阐述了，宿主细胞对外来病原微生物的识别和病毒感染诱导I型干扰素表达信号转导的调控是细胞抗病毒天然免疫信号转导这一领域中两个十分重要的问题。在该论文的研究工作中，作者通过报告基因筛选鉴定得到新型核酸受体LSM14A，为细胞抗病毒天然免疫提供了一种新的病原分子识别机制；通过Flag亲和层析和质谱鉴定，发现ISG56作为I型干扰素诱导蛋白，负反馈调节病毒感染诱导的I型干扰素表达，揭示了一种新的抗病毒天然免疫信号转导负反馈调节机制，为细胞抗病毒反应的精细调控提供了新的认识。