冰冻显微免疫标记技术

第1章冰冻显微免疫细胞化学的发展和应用

1.1历史筒述和技术发展

1.2标记方法的选择

1.3显微免疫细胞化学在分子生物学和医学研究的应用

1.3.1在细胞分子生物学中的应用

1.3.2在病理学和肿瘤诊断中的应用

第2章冰冻切片和光学显微镜的免疫细胞化学

2.1免疫标记的基本原理

2.1.1抗体的种类

2.1.2抗体的结构

2.1.3抗原定位标记物

2.1.4抗体的标记方式

2.1.5抗体对不同抗原的双重或多重标记

2.2抗体特异性测定和实验对照

2.2.1测定新的第一抗体

2.2.2抗体所引起的非特异性染色

2.2.3防止非特异性标记的方法

2.3生物样品的处理和冰冻切片

2.3.1大组织块的冰冻切片方法

2.3.2冰冻半薄切片方法

2.4免疫荧光标记

2.4.1抗体和标记方法的选择

2.4.2荧光染料的特性和选择

2.4.3双重或多重荧光标记

2.4.4标记的步骤

2.5免疫过氧化物酶显色标记

2.5.1抗生物素蛋白一生物素方法

2.5.2快速临床免疫组织化学染色方法

2.6免疫标记出现问题的处理

2.7免疫标记实例

2.7.1老鼠胆管纤毛的冰冻半薄切片荧光标记

2.7.2用荧光和冰冻超薄切片对人胎盘抗原定位

2.7.3快速免疫组织化学染色

第3章冰冻超薄切片和电子显微镜的免疫金标记

3.1引言

3.2设备和试剂的准备

3.2.1冰冻切片机

3.2.2切片刀

3.2.3支持膜制作和碳覆盖

3.2.4免疫金粒标记物的制备

3.3生物样品的固定和处理方法

3.3.1固定剂

3.3.2其他影响固定质量的条件

3.3.3固定程序

3.3.4样品包埋处理

3.3.5蔗糖冰冻保护

3.3.6样品的安放和冰冻

3.4冰冻超薄切片

3.4.1样品的初修整和半薄切片

3.4.2样品块的细修整

3.4.3冰冻超薄切片

3.4.4切片的收集

3.4.5冰冻切片的保存

3.5免疫标记

3.5.1标记方法和程序

3.5.2蛋白A法

3.5.3IgG法

3.6图像的分析和问题处理

3.7应用实例

3.7.1蛋白A标记的应用例子

3.7.2IgG方法的应用例子

第4章快速冰冻固定方法

4.1引言

4.2冰冻固定的原理

4.3冰冻保护剂

4.3.1渗透性冰冻保护剂

4.3.2非渗透性冰冻保护剂

4.4冰冻固定的主要方法

4.4.1插入式冰冻方法

4.4.2冷金属块撞击式冰冻固定

4.4.3丙烷喷射冰冻固定

4.4.4喷洒式冰冻固定

4.4.5高压冰冻固定

第5章高压冰冻固定

5.1高压冰冻固定的基本原理

5.2样品处理和装放的关键步骤

5.2.1样品载体

5.2.2载体内细胞和组织的填充剂

5.2.3冰冻保护剂

5.2.4样品的装放

5.3冰冻样品的处理

5.4常规化学固定和高压冰冻固定效果的比较

5.4.1化学固定和高压冰冻固定的比较

5.4.2高压冰冻固定的局限性

5.5冰冻固定过程中出现的问题和解决方法

5.5.1高压冰冻固定的注意事项

5.5.2冰冻固定过程中出现的问题和解决方法

第6章冰冻置换

6.1概述

6.2冰冻置换的条件

6.2.1冰冻置换的温度和材料的准备

6.2.2冰冻置换的有机溶剂的选择和评估

6.2.3冰冻置换装置

6.3冰冻置换方法

6.3.1加入固定剂的冰冻置换

6.3.2免疫标记的冰冻置换

6.3.3冰冻置换的各种使用方法

第7章低温包埋和免疫标记

7.1渐进低温脱水和丙烯树脂包埋

7.1.1温度调整的方法和脱水溶剂

7.1.2丙烯树脂的特点和Lowicryl的配方

7.1.3渐进低温脱水方法

7.1.4低温渗透

7.1.5低温包埋

7.1.6树脂聚合

7.1.7Lowicryl树脂包埋块的切片

7.2LRWhite和LRGold树脂包埋

7.2.1LRWhite树脂的准备和包埋

7.2.2LRGold树脂的包埋

7.3免疫标记

7.3.1免疫标记的准备和应注意的问题

7.3.2丙烯酸树脂切片的免疫标记步骤

7.3.3后包埋免疫标记法

7.4免疫标记信号增强法

7.4.1纳米金-银染信号增强法

7.4.2胶体金/抗生物素法

7.4.3生物素-抗生物素金技术

7.4.4生物素化酪胺和纳米金银染法

7.5免疫标记中可能遇到的问题和处理方法

7.6应用实例

7.6.1动物单层细胞的后包埋免疫标记

7.6.2植物细胞的低温包埋和免疫标记

7.6.3大鼠胰腺和肝组织的免疫电镜标记生物素一酪胺增强法

第8章前包埋免疫电镜技术

8.1细胞和组织标记前的处理

8.2抗体标记

8.3前包埋免疫标记应用实例

8.3.1过氧化物酶标记单层培养细胞抗原

8.3.2纳米金前包埋免疫电镜

8.3.3前包埋纳米金一银染和酪胺扩增法

8.4前包埋免疫双标记

第9章荧光显微镜和免疫电镜的对应定位技术

9.1概述

9.2突变细胞荧光活体和超微结构对应定位技术

9.2.1活体突变细胞定位

9.2.2电镜样品的处理和细胞定位

9.3荧光纳米金在荧光和免疫金标记的对应定位

9.3.1荧光纳米金探针的结构和特性

9.3.2荧光纳米金标记方法

9.4冰冻超薄切片的对应免疫荧光光镜和电镜

9.5量子点的光电镜对应定位

9.5.1量子点作为免疫细胞学标记物的主要特点

9.5.2量子点标记应用实例

9.6荧光蛋白的对应光电镜定位

9.6.1细胞荧光蛋白表达的光电镜对应标记方法

9.6.2绿荧光蛋白光氧化的对应荧光和电镜方法

第10章冰冻断裂复型的免疫电镜

10.1概述

10.2冰冻断裂和刻蚀

10.2.1样品的准备

10.2.2冰冻保护甘油渗透方法

10.2.3冷冻处理

10.2.4冰冻断裂

10.2.5冰冻刻蚀

10.2.6复型

10.2.7复型膜的收集和清理

10.3复型膜面的免疫标记

10.3.1常规的标记步骤

10.3.2冰冻、断裂和复型前标记

10.3.3冰冻断裂后标记

10.3.4断裂和复型后的标记

10.3.5复型一标记一切片和复型一标记一整体装放

10.4应用实例

10.4.1用SDS消化冰冻断裂复型和细胞化学标记膜间蛋白免疫金标记胞间连接复合物

10.4.2用SDS消化冰冻断裂复型标记螺旋菌壁黏附素的新方法

第11章负染色和免疫金标记技术

11.1概述

11.2负染色技术

11.2.1负染色的材料和准备

11.2.2负染色方法

11.3负染色免疫电镜方法

11.3.1负染色免疫电镜常规步骤

11.3.2负染色免疫电镜应用实例

11.4冰冻负染色方法

11.4.1材料准备

11.4.2非染色冰冻样品的制作步骤

11.4.3薄膜玻璃化负染色样品的制作

11.5负染色需要注意的问题

附录Ⅰ

附录Ⅱ部分冰冻固定、免疫标记和抗体制作技术网址

参考文献

　　本书系统地介绍了生物样品的冰冻处理、快速冰冻固定方法和免疫细胞化学技术。对技术原理阐述清楚，对技术操作的步骤、方法说明详细。此外，本书还有一些特点，如对关键步骤特别附简图和图片说明，使读者容易理解；对各种技术的优、缺点进行了分析；指出了在实验操作中出现问题的解决方法等。本书不失为一本好教材，也可作为细胞生物学、医学研究人员的参考书。　　本书共11章，系统地介绍了生物样品的冰冻处理、快速冰冻固定方法和免疫细胞化学技术。除介绍当前在分子生物学上广泛使用的各种冰冻免疫显微标记技术外，还重点介绍了近年来发展的超薄冰冻切片、高压冰冻固定、光学和电子显微镜对应定位和冰冻负染色等新技术。书中在讲述方法的同时，简述技术原理，并通过图表和实例解释技术要点，还针对实验中易出现的问题提出了解决办法。　　本书可作为大学生和研究生的参考教材，并可作为从事生物、医药、医学研究和临床诊断相关教学和研究人员的参考书。