现代分子生物学实验

第1章 特定基因的克隆

附1.1 Bad基因介绍

实验1.1 从核酸数据库中获得mBad基因编码序列

实验1.2 从细胞中提取总RNA

实验1.3 逆转录获得小鼠B16F10细胞的cDNA

实验1.4 PCR扩增目的基因mBad

附1.2 mBad基因PCR引物的设计

实验1.5 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳回收

实验1.6 SDS碱裂解法提取质粒DNA

实验1.7 用质粒DNA小量抽提试剂盒制备质粒DNA

附1.3 克隆载体的选择

实验1.8 DNA的限制性酶切和酶切产物的回收

附1.4 酶切位点的选择

实验1.9 连接

附1.5 平端DNA的连接反应

实验1.10 转化

实验1.11 阳性重组子的筛选以及测序验证

第2章 克隆基因的表达和表达产物的纯化

实验2.1 His-tag EGFP在大肠杆茵中的表达和纯化

附2.1 融合蛋白表达载体pHis-EGFP的构建及融合蛋白的亲和纯化结果

实验2.2 GST-EBFP融合蛋白在大肠杆茵中的表达和纯化

附2.2 GST-EBFP的纯化结果

实验2.3 GST-EBFP在巴氏毕赤酵母中的表达

附2.3 pPICZ C-GST-EBFP重组质粒的构建、鉴定

实验2.4 GST-EGFP在昆虫细胞中的表达纯化

附2.4 重组AcNPV-EGFP病毒的构建与筛选

第3章 特定基因的功能研究

实验3.1 用重叠延伸PCR法进行EGFP基因的定点突变

附3.1 重叠延伸PCR法基因定点突变的实验结果

实验3.2 用单管大引物PCR法进行EGFP基因的快速定点突变

附3.2 单管大引物PCR法基因定点突变的实验结果

实验3.3 mBad基因在293T细胞中的瞬时表达

实验3.4 western b10tting检测瞬时转染基因的表达

实验3.5 人DNMT1基因干扰质粒shRNA真核表达载体的构建

附3.3 干扰质粒的设计

实验3.6 质粒DNA的大量纯化

实验3.7 脂质体法转染哺乳动物细胞MCF-7

附3.4 质粒转染结果

实验3.8 实时荧光定量PCR法检测DNMT1基因mRNA表达水平

附3.5 荧光定量PCR实验结果

实验3.9 利用荧光显微镜检测细胞骨架蛋白β-actin在A549细胞中的定位

附3.6 A549细胞中β-actin的荧光显微镜照片

实验3.10 流式细胞仪检测紫杉醇对A549细胞周期的影响

附3.7 紫杉醇处理对A549细胞周期的影响

实验3.11 流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞增殖

附3.8 流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞的增殖

实验3.12 流式细胞仪检测细胞凋亡

附3.9 流式细胞仪检测Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡

第4章 蛋白质与蛋白质的相互作用

实验4.1 酵母双杂交体系发现FADD与Fas的相互作用

实验4.2 二维电泳比较FADD和FADD-/-细胞株的蛋白质表达差异

附4.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的经验配方

附4.2 2DE常见问题与解决办法

实验4.3 GST pull-down验证FADD与Fas的相互作用

附4.3 GST pull-down验证FADD与Fas相互作用的结果示意图

实验4.4 免疫共沉淀分析FADD与Fas相互作用的结构域

附4.4 Fas与FADD不同结构域相互作用的Co-IP结果示意图

实验4.5 荧光共振能量转移技术（FRET）分析FADD与Fas相互作用

实验4.6 利用噬茵体肽库展示技术筛选与链霉亲和素特异性结合的氨基酸序列

第5章 DNA与蛋白质的相互作用

实验5.1 EMSA分析转录因子NF-kB与DNA结合序列的结合

实验5.2 染色质免疫沉淀（ChIP）分析NF-kB与TRAF1基因启动子序列的结合

实验5.3 报告基因检测技术分析不同细胞中PSM_A基因的启动子活性

附录Ⅰ 网络资源

附录Ⅱ 常用仪器及供应商

附录Ⅲ 著名生物试剂公司及其特色产品

附录Ⅳ 常用溶液配制

附录Ⅴ 常用工具酶

附录Ⅵ 实验室常用技术参数资料

《现代分子生物学实验》的编写注重实用性和创新性统一，在实验内容的编排上不再按照“基础实验+综合实验”的基本模式，而是依据分子生物学研究的自身特点和一般流程，分为特定基因的克隆、克隆基因的表达和表达产物的纯化、特定基因的功能研究、蛋白质与蛋白质的相互作用、DNA与蛋白质的相互作用5个部分。每部分整合若干实用的分子生物学研究技术，使读者对每一个实验的目的和适用领域更加明确，也便于快速地选择相关实验技术参考借鉴。《现代分子生物学实验》除了分子生物学最为基础的实验技术外，也涵盖了目前比较先进的研究技术和研究方法，如RNA干扰、实时荧光定量PCR、流式细胞仪分析、荧光共振能量转移技术等。在每个实验中，都特别强调操作的注意事项和实验取得成功的关键，注重实用性。《现代分子生物学实验》适合作为高等院校生命科学类及相关专业分子生物学实验课程的教材使用，也可供相关科研及实验技术人员参考。