新药药理学研究方法

第1章分子药理学实验方法1

11核酸技术3

111质粒操作3

112PCR技术6

113重组DNA技术14

114基因转染技术18

115核酸杂交23

116基因芯片技术33

117反义核酸技术38

118RNA干扰42

12蛋白质技术45

121常规蛋白质定量方法45

122酶联免疫吸附测定47

123聚丙烯酰胺凝胶电泳51

124Western印迹法57

125免疫共沉淀59

126酵母双杂交62

127膜片钳技术67

128放射配体受体结合实验73

13细胞培养和形态、功能检测80

131常规细胞培养80

132原代大鼠细胞分离和培养85

133细胞凋亡检测方法91

134流式细胞分析96

135免疫组织化学染色100

136酶联免疫斑点法104

137单细胞微凝胶电泳107

参考文献108

第2章新药主要药效学试验方法112

21中枢神经系统药物114

211麻醉药物114

212镇静催眠药123

213抗癫痫、抗惊厥药物129

214抗帕金森病药物145

215抗老年性痴呆药物149

216抗精神分裂症药物156

217抗焦虑药实验方法161

218抗抑郁药物178

219镇痛药物192

2110中枢兴奋药物197

2111阿片戒断反应治疗药物199

22 心血管系统药物202

221抗心律失常药物202

222抗高血压药物207

223抗心肌缺血药物211

224溶栓药物218

225抗凝血药物224

226抗血小板药物227

227调血脂药物和抗动脉粥样硬化药物234

228防治脑缺血损伤药物237

23抗肿瘤药物242

231体外抗肿瘤试验242

232常规体内抗肿瘤药物试验245

233生物反应调节剂的试验方法247

234原位移植模型抗肿瘤试验247

235抗肿瘤转移试验249

236抗肿瘤血管新生药物试验254

24抗细菌、真菌、病毒和寄生虫药物257

241抗细菌药物257

242抗真菌药物271

243抗乙型肝炎病毒药物278

244抗人类免疫缺陷病毒药物281

245抗疟药物286

25抗骨和关节病药物291

251治疗骨质疏松症药物291

252促进骨折愈合药物293

253抗关节炎药物295

26抗糖尿病药物299

261糖耐量试验300

262化学诱导剂致动物糖尿病模型300

263遗传性糖尿病动物模型试验303

264α葡糖苷酶活性测定305

27消化系统药物306

271抗消化性溃疡药物306

272抗胃炎药物309

273胃肠解痉药物311

274催吐药及止吐药313

275泻药及止泻药315

276抗急性肝损伤药物316

277抗肝纤维化药物318

28血液系统药物321

281防治贫血药物321

282治疗白细胞减少和粒细胞缺乏症药物323

283治疗血小板减少症的药物325

284血容量扩充剂326

29呼吸系统药物328

291平喘药物328

292镇咳药物334

293祛痰药物336

210泌尿生殖系统药物339

2101抗肾小球肾炎药物339

2102促进尿道结石排出药物341

2103治疗男性勃起功能障碍药物344

2104治疗良性前列腺增生药物347

2105作用于子宫平滑肌药物348

211抗放射病药物352

参考文献356

第3章新药非临床安全性评价方法366

31一般药理学研究367

311目的和意义367

312实验材料和分组给药367

313中枢神经系统研究368

314心血管系统研究372

315呼吸系统研究373

316追加或补充的安全药理学研究373

32单次给药毒性试验374

321目的和意义374

322主要内容和要求376

323急性毒性试验常用方法379

33重复给药毒性试验382

331目的和意义382

332主要内容和要求383

333注意问题386

34遗传毒性试验392

341鼠伤寒沙门菌诱变试验（Ames试验）392

342体外培养哺乳动物细胞染色体突变试验396

343小鼠的骨髓微核试验397

35生殖毒性试验401

351一般生殖毒性试验401

352致畸敏感期毒性试验403

353围产期毒性试验405

36致癌试验407

361致癌试验的必要性407

362致癌试验原则409

363致癌试验的剂量选择410

364哺乳动物培养细胞恶性转化试验413

365动物短期致癌试验414

366动物长期致癌试验414

367生物技术药物致癌试验416

37毒代动力学在药物长期毒性评价中的应用417

371毒代动力学研究的基本考虑和方法419

372长期毒性评价中药物暴露评价的其他方面420

38免疫毒性试验420

381基本原则421

382常规毒性试验中免疫毒性相关指标422

383额外的免疫毒性试验423

384免疫原性、自身免疫和免疫刺激425

39局部刺激性试验426

391皮肤刺激性试验426

392注射给药部位刺激性试验428

393直肠刺激性试验430

394阴道刺激性试验430

395滴鼻剂和吸入剂刺激性试验431

396口腔用药或滴耳剂刺激性试验432

397眼刺激性试验433

398溶血性试验434

310过敏性试验436

3101主动皮肤过敏试验437

3102豚鼠最大化试验和Buehler试验439

3103啮齿类局部淋巴结试验440

3104被动皮肤过敏试验442

3105全身主动过敏试验443

3106皮肤光毒性试验444

3107皮肤光过敏反应试验446

3108过敏性试验的注意事项448

311药物依赖性的动物试验449

3111阿片类药物的身体依赖性试验方法450

3112镇静催眠药和抗焦虑药的身体依赖性试验方法456

3113评价药物精神依赖性的试验方法458

参考文献464

第4章非临床药代动力学试验方法466

41非临床药代动力学试验设计467

411总体要求467

412研究项目468

413数据处理与分析470

414结果与评价470

415问题与处理思路471

42分析方法的建立与确证472

421方法学确证的定义和分类473

422对参照标准品的要求474

423化学分析方法的形成474

424方法学确证的建议476

425免疫分析方法和微生物分析方法的形成477

426确证后的方法在药物分析中的应用478

427档案管理和方法学结果总结480

428术语481

429生物分析方法确证实例482

43化学药物非临床药代动力学实验方法491

431单次给药的药代动力学研究491

432多次给药的药代动力学研究496

433口服药物的吸收和生物利用度研究498

434给药后药物在体内的组织分布研究500

435药物在体内的粪、尿、胆汁排泄研究505

436生物转化研究509

437对药物代谢酶活性的影响研究533

44生物技术药物药代动力学研究方法537

441概论537

442常用分析方法544

参考文献556

第5章新药临床前评价的试验设计与统计分析559

51试验设计概述559

511试验设计的意义559

512试验设计的原理560

513试验设计三要素561

514试验设计四原则561

515试验设计类型562

52假设检验中样本大小的估计563

521样本大小估计所需要的前提条件563

522采用定量资料的单组设计、配对设计或交叉设计时样本大小的估计564

523采用成组设计时所需的样本含量565

524多个样本均数的比较或完全随机区组设计时所需样本含量566

525两总体概率比较时所需的样本含量567

526多个样本频率比较时所需样本含量568

53常见的试验设计类型及相应资料的统计分析568

531正态分布的概念与正态性检验568

532方差齐性的概念与方差齐性检验570

533单组设计和配对设计及相应资料的统计分析570

534成组设计及相应资料的统计分析572

535单因素多水平设计及相应资料的统计分析574

536优效性、等效性和非劣效性检验576

54较复杂的试验设计简介579

541配伍组设计579

542拉丁方设计580

543交叉设计581

544析因设计583

545重复测量设计583

546正交设计584

547均匀设计585

55常见的定性资料的表达格式与统计分析586

551横断面研究设计的2×2表资料及其统计分析586

552队列研究设计的2×2表资料及其统计分析588

553病例对照研究设计的2×2表资料及其统计分析588

554配对研究设计的2×2表资料及其统计分析589

555双向无序R×C表资料及其统计分析590

556结果变量为有序变量的单向有序R×C表资料及其统计分析591

557双向有序且属性不同的R×C表资料及其统计分析593

558双向有序且属性相同的R×C表资料及其统计分析594

56按直线规律研究两变量之间的相互关系与依赖关系595

561直线相关与回归分析的基本概念595

562直线相关与回归的正确步骤595

563直线相关与回归分析常见错误595

564直线相关与回归分析计算公式及假设检验596

565直线相关与回归分析的区间估计问题——利用回归方程进行预报和控制

598

566直线相关与回归分析应用实例599

567用概率法求半数有效量600

57按曲线规律研究两变量之间的依赖关系602

571曲线回归分析的基本概念602

572曲线回归分析的正确步骤604

573曲线回归分析应用实例605

574曲线回归分析应用中的常见错误607

58单因素K水平（K≥2）设计生存时间数据统计分析609

581生存时间数据特点及统计描述609

582由生存时间数据计算所得的多个生存率的假设检验611

583由生存时间数据描述的生存曲线的比较612

59药效学和毒理学的试验设计与统计分析614

591常见的试验设计模式与存在的问题614

592定量资料的数据结构与统计分析方法的合理选择620

593析因设计定量资料统计分析方法及实例621

594重复测量设计定量资料统计分析方法及实例622

参考文献623

第6章新药筛选方法学625

61样品库的建立626

611筛选样品的要求626

612天然产物628

613提取物633

614组合生物催化637

615合成化合物641

62高通量细胞筛选模型651

621基于STAT3/5信号通路的药物筛选模型651

622基于HIV Tat基因转录调控通路的药物筛选模型654

623基于X蛋白反式激活的抗HBV药物筛选模型655

624基于干扰素α信号通路的抗病毒药物筛选模型657

625基于PPARγ信号通路的药物筛选模型659

626基于雌激素受体β亚型信号通路的药物筛选模型662

627基于NFκB信号通路的药物筛选模型664

63高通量筛选667

631高通量药物筛选常用仪器667

632筛选操作668

633数据存储和处理669

参考文献669

第7章新药发现过程中吸收、代谢、分布和毒性的研究674

71吸收的体外和原位模型675

711吸收的体外模型675

712在体单次灌流方法研究药物在肠道的吸收678

72分布的体外模型680

721药物与血浆蛋白结合实验680

722血脑屏障模型682

73代谢的体外模型684

731代谢稳定性研究684

732代谢酶的确定686

733代谢酶抑制的测定687

734肠道菌群对药物的代谢转化研究690

74早期发现毒理学研究691

741预测模型691

742体外高通量毒性筛选692

743活性代谢产物的检测695

744高内涵筛选技术695

745动物试验696

参考文献696

附录正常实验动物和模型动物各项指标参考值698

表1实验动物安全采血量698

表2外周血血细胞指标（一）698

表3外周血红细胞及血小板计数指标（二）699

表4外周血白细胞及其分类计数（三）700

表5外周血白细胞指标（四）701

表6血清生化指标（一）701

表7血清生化指标（二）702

表8血清生化指标（三）702

表9心电图指标702

表10凝血和纤溶系统指标703

表11常见动物骨髓象703

表12实验动物脏器重量704

表13实验动物体温和血液温度704

表14实验动物临床生理指标705

表15实验动物饲料量、饮水量、产热量705

表16实验动物排便排尿量706

表17实验动物生殖生理指标706

表18实验动物蛋白指标707

表19实验动物肠道长度708

表20雌性NOD/Lt小鼠不同周龄血糖变化708

表21kk小鼠携带AY基因饲喂高脂饲料后不同性别动物的血糖变化710

表22kk小鼠携带AY基因饲喂繁殖饲料不同性别动物的血糖变化710

表23kk小鼠未携带AY基因饲喂高脂饲料不同性别动物的血糖变化711

表24kk小鼠未携带AY基因饲喂繁殖饲料不同性别动物的血糖变化711

表25不同年龄nu/nu、nu/+小鼠脾脏中含免疫球蛋白的细胞（CIg）分布712

表26间接免疫荧光测定不同淋巴组织浆细胞中类型分布712

表27SCID小鼠相关数据713

表28自发性高血压（SHR）大鼠与WKY大鼠血流动力学参数713

表29年轻自发性高血压（SHR）大鼠（12周龄）生化检验参数（一）713

表30年老自发性高血压（SHR）大鼠（22周龄）生化检验参数（二）714

表31年轻易卒中型自发性高血压（SHRsp）大鼠（12周龄）生化检验参数（三）

715

表32年老易卒中型自发性高血压（SHRsp）大鼠（22周龄）生化检验参数（四）

716

表33年轻WKY大鼠（12周龄）生化检验参数（五）717

表34年老WKY大鼠（22周龄）生化检验参数（六）718

缩略词对照表719

现代新药药理学研究涉及多学科领域。本书介绍了常用的分子药理学实验方法、新药的主要药效学评价方法和非临床安全性评价方法；同时本书述介绍了药理学实验中常用的统计学知识和分析方法，以及具有特色的基于报告基因的新药筛选方法和新药早期研究方法。本书编审人员多年从事新药药理学研究，具有丰富的实践经验。书中介绍的方法可操作性强，内容较新颖，对新药研发人员开展药理学实验具有很强的指导作用。本书的读者对象为从事新药研发的科研人员和医药院校的学生、研究生。

药理学研究是新药研究和开发的重要内容之一，现代新药药理学研究涉及多学科领域。本书介绍了常用的分子药理学实验方法、新药的主要药效学评价方法和非临床安全性评价方法；同时本书述介绍了药理学实验中常用的统计学知识和分析方法，以及具有特色的基于报告基因的新药筛选方法和新药早期研究方法。本书编审人员多年从事新药药理学研究，具有丰富的实践经验。书中介绍的方法可操作性强，内容较新颖，对新药研发人员开展药理学实验具有很强的指导作用。本书的读者对象为从事新药研发的科研人员和医药院校的学生、研究生。