脂质体

Ⅰ一般方法

第1章脂质体的制备

1.1磷脂的处理及贮存

1.2制备方法

1.2.1手摇法

1.2.2超声法

1.2.3冻干再水化法

1.2.4逆相蒸发法

1.2.5表面活性剂去除法

1.2.6高压均质法

1.3脂质体的纯化

1.3.1柱过滤

1.3.2离心法纯化脂质体

参考文献

第2章脂质体的表征

2.1引言

2.2脂质体组分的化学分析

2.2.1分光光度法对磷脂进行定量分析

2.2.2脂质的薄层色谱

2.2.3(磷)脂的HPLC分析

2.2.4胆固醇和α-生育酚的HPLC分析

2.2.5脂肪酸的GLC分析

2.2.6脂质体磷脂降解的化学分析

2.3脂质体的物理表征

2.3.1包封百分比的测定

2.3.2释放率的测定

2.3.3包封体积的测定

2.3.4层状结构

2.3.5脂质体的粒径测定

2.3.6PCS测定zeta电势

2.4其他方法

2.4.1Bligh和Dyer萃取法

2.4.2Sep-Pak微柱萃取

2.4.3羧基荧光素和钙黄绿素溶液的制备

参考文献

第3章物理研究方法：差示扫描量热法

3.1引言

3.2技术概述

3.2.1差示扫描量热法

3.2.2高灵敏度差示扫描量热法

3.2.3调制温度差示扫描量热法

3.3DSC测量的实际问题

3.3.1坩埚的选择

3.3.2样品量

3.3.3校准

3.3.4扫描速率

3.3.5研究脂质体要求的条件

3.3.6HSDSC测量的实际应用

3.3.7MTDSC测量实例

3.4DSC及相关技术在脂质体研究中的应用

3.4.1脂质体的相转变行为

3.4.2多组分体系的相转变

3.4.3磷脂－药物的相互作用

3.4.4脂质体作为膜模型的DSC研究

3.4.5冻干脂质体的MTDSC研究

致谢

参考文献

第4章脂质体研究中的荧光分析法

4.1荧光分析法研究脂质体融合

4.1.1铽/二吡啶羧酸分析法研究水性内容物的混合

4.1.2水性内容物混合的氨基萘三磺酸/对一二甲苯二溴化吡啶(ANTS/DPX)分析

4.1.3NBD/罗丹明共振能量转移法分析脂质混合..

4.1.4荧光分析测定内侧单分子层的混合

4.2荧光分析法研究脂质体的渗透性

4.2.1羧基荧光素或钙黄绿素的释放

4.2.2Tb/DPA复合物的释放

4.2.3ANTS/DPX的释放

4.3荧光法检测蛋白质与磷脂膜的结合

4.3.1通过膜结合的荧光团检测

4.3.2用膜内蛋白缔合的荧光团检测

4.4脂质体作为pH传感器研究细胞相互作用

4.4.1Pyranine(HPTS)分析法

4.4.2双荧光团分析

4.5双光子激发荧光显微法检测巨大型脂质体中的脂质相

4.5.1直接观察双分子层中脂质区域共存

4.5.2巨大型单层脂质体

4.5.3双光子激发显微法

4.5.4二元磷脂混合物中凝胶相/液相共存的观察

致谢

参考文献

第5章脂质体的稳定性、贮存及灭菌

5.1引言

5.2防止化学降解

5.2.1磷脂氧化

5.2.2磷脂的水解

5.3防止物理变化

5.4脂质体的冻干

5.4.1引言

5.4.2脂质体冻干的重要因素

5.4.3冻干状态的稳定性

5.4.4冻干方案示例

5.5无菌脂质体制剂的制备

参考文献

第6章用大单室囊泡包封弱碱性药物、反义寡核苷酸和质粒DNA递送药物

6.1引言

6.2磷脂浓度的测定

6.3用确定孔径的聚碳酸酯膜挤出制备大单室脂质体

6.4弱碱性药物基于跨膜pH梯度在LUV中积聚

6.5包封基因药物的脂质体系统：用于体内递送基因和反义寡核苷酸的长循环载体

参考文献

第7章脂质体的表面修饰

7.1引言

7.2蛋白质和多肽连接到脂质体表面

7.2.1蛋白质和多肽通过氨基与脂质体结合

7.2.2通过巯基将蛋白质连接到脂质体上

7.3将碳水化合物(糖)或其他小分子结合于脂质体表面

7.4将诊断用金属原子连接于脂质体表面

7.4.1低分子质量螯合物DTPA与脂质相连，从而插入脂质体膜

7.4.2在与脂质体结合的螯合物上负载金属

参考文献

第8章空间保护型长循环脂质体

8.1引言

8.2空间保护聚合物(PEG)与脂质体相连接

8.2.1脂质体中插入PEG

8.2.2在预制的脂质体上连接PEG

8.2.3长循环脂质体的体内分布对其粒径的依赖性

8.2.4长循环脂质体在肿瘤组织中的蓄积

8.3不同配体与脂质体中接枝聚合物的远端相连

8.3.1配体与肼化PEG相连

8.3.2配体与PDP活化的PEG相连.

8.3.3通过COOH-活化的PEG连接配体

8.3.4将含有伯氨基的配体与含有pNP-PEG-PE的脂质体相连

8.3.5制备“配体-PEG-脂质”结合物并将其插入脂质体中

8.4脂质体表面上可解离的PEG

8.5对PEG化脂质体的消除有影响作用的生物因素

参考文献

第9章生物系统中的脂质体

9.1引言

9.2脂质体与细胞的相互作用

9.2.1脂质体-细胞相互作用的可能方式：吸附、(受体介导的)胞吞作用、脂质交换、融合

9.2.2标记物

9.2.3细胞系和原代细胞培养

9.2.4肝细胞的分离及培养

9.3脂质体的生物分布

9.3.1动物模型/种属差异

9.3.2体内脂质体-细胞相互作用

9.3.3标记物

9.3.4脂质体的动力学及组织分布

致谢

参考文献

第10章基因递送中的阳离子脂质体

10.1引言

10.2质粒DNA的分离

10.3质粒DNA浓度的定量

10.4N/P比的计算

参考文献

Ⅱ专题和应用

第11章pH敏感脂质体

11.1引言

11.2pH敏感的机理

11.3方法

11.3.1pH敏感脂质体的制备

11.3.2pH敏感脂质体的表征

11.3.3pH敏感脂质体的细胞结合

参考文献

第12章放射标记脂质体用于造影和生物学分布研究

12.1引言

12.2用于追踪放射标记脂质体的仪器

12.2.1γ射线照相机

12.2.2正电子发射断层成像照相机

12.2.3γ井型计数器

12.3γ-发射放射性核素标记脂质体的方法

12.3.1概述

12.3.2用于标记脂质体的放射性核素

12.3.3放射性核素标记脂质体的方法

12.4放射标记脂质体的表征

12.4.1放射标记体外稳定性评价

12.4.2体内放射标记评价

12.5图像采集和分析方法

12.6以γ井型计数器测定组织生物学分布

参考文献

第13章恒温滴定量热法(ITC)

13.1引言

13.2仪器和技术原理

13.3MCSITC的计算机辅助测量

13.3.1热力滴定

13.4临界胶束浓度的评价

13.4.1热动力学背景

13.4.2测量

13.5表面活性剂一双分子层膜平衡

13.5.1表面活性剂分配进入脂质膜

13.5.2脂质体增溶

参考文献

第14章囊泡型磷脂凝胶(VPG)

14.1背景

14.1.1静注用脂质体面临的生物药剂学和技术上的挑战

14.1.2局部给药脂质体面临的生物药剂学和技术上的挑战.

14.1.3磷脂分散体：溶胀和相

14.1.4机械应力：囊泡分散体和囊泡型磷脂凝胶的形成

14.1.5VPG的概念

14.2VPG的制备

14.2.1用单一磷脂制备VPG

14.2.2用两种或多种脂质制备VPG

14.3VPG载药

14.3.1直接包封

14.3.2被动载药

14.3.3掺入/结合

14.4VPG的灭菌

14.5VPG的表征

14.5.1形态

14.5.2流变学、黏性

14.5.3体外的缓释行为

14.6由VPG制备SUV分散体

14.7由VPG制备的SUV分散体的表征

14.7.1囊泡粒径分布

14.7.2包封率

14.8体内应用

14.8.1吉西他滨VPG的制备和体外表征

14.8.2肿瘤内注射吉西他滨VPG

14.8.3静注吉西他滨VPG

参考文献

第15章脂质体DNA疫苗：包封操作

15.1引言

15.2材料

15.3采用脱水一再水化法将质粒DNA包封于脂质体中

15.3.1溶液的配制

15.3.2操作步骤

参考文献

附录

索引

　　本书共包括两部分。第一部分包括10章，覆盖了大量重要研究领域内的重要实验方案，包括脂质体的制备；脂质体的表征；不同物理方法在脂质体研究中的应用；脂质体的灭菌、稳定性、贮存；脂质体包封药物；根据不同目的对脂质体表面进行修饰，其中包括制备靶向脂质体；长循环脂质体；脂质体在生物系统内的行为以及脂质体作为转染载体的应用。第二部分包括5章，讲述了研究和应用脂质体的一些具体领域。这部分所含章节涉及一些特殊专题，包括pH敏感脂质体、诊断造影脂质体、脂质体DNA疫苗、脂质体的恒温滴定量热测定以及囊泡型磷脂凝胶。　　本书原著为第二版，是一部经典的实用技术手册。原著由脂质体各个研究领域的权威专家编写，内容覆盖脂质体技术的所有关键技术。　　全书分为两大部分：第一部分提供了几乎脂质体研究基本技术的全部实验细节，包括脂质体的制备、表征和贮存；脂质体包封药物；对脂质体表面进行修饰从而控制脂质体在生物环境内的行为；长循环脂质体以及阳离子脂质体作为转染载体的应用。第二部分重点介绍脂质体应用的具体领域，包括pH敏感脂质体；诊断造影脂质体；脂质体DNA疫苗；脂质体的恒温滴定量热测定以及囊泡型磷脂凝胶。　　对于有经验的研究人员来说，本书是不可多得的实验手册和参考指南，同时对于刚刚步入这一领域的研究者来说，本书亦是理想的入门书籍。