医学生物化学与分子生物学实验教程

Introduction

1.Learning Objectives

2.Laboratory Regulations

3.Experimental Report

绪论

一、学习目标

二、实验室规则

三、实验报告

Chapter 1 Operation and Calibration of Volumetric Equipment and Data Processing

1.1 Regulations of Common Volumetric Equipment

1.2 Calibration of Volumetric Equipment

1.3 Error and Data Processing

Experiment 1 Operation and Calibration of Pipette and Micropipette and Data Processing

第一章 量器的使用、校正与实验数据的处理

一、常用量器的使用规则

二、常用量器容量的校正

三、实验误差与数据处理

实验一 移液管和微量可调式移液器的使用、校正与数据处理

Chapter 2 Spectrophotometry

2.1 Basic Knowledge ofthe Light Absorption

2.2 Basic Laws ofAbsorbance

2.3 Determination ofAbsorbance

2.4 Quantitative Method

Experiment 2 Determine the Concentration of Unknown Solution by Spectrophotometry

第二章 分光光度技术

一、光吸收的基本知识

二、光吸收的基本定律

三、吸光度的测量

四、定量分析方法

实验二 分光光度法测定未知溶液的浓度

Chapter 3 Chromatography

3.1 Principles，Characteristics and Classifications of Chromatography

3.2 Common Types ofChromatography

3.3 Essential System and Operations of Column Chromatography

Experiment 3 Sephadex G-25 Gel Chromatography

Experiment 4 Ion Exchange Chromatography on Amino Acid Separation

第三章 层析技术

一、层析技术的基本原理、特点与分类

二、常用的层析方法

三、柱层析的基本装置和基本操作

实验三 Sephadex G-25凝胶层析

实验四 氨基酸的离子交换层析分离

Chapter 4 Electrophoresis

4.1 Basic Principles ofElectrophoresis

4.2 Classifications ofElectrophoresis

4.3 Commonly Used Electrophoresis

4.4 Staining Methods for Protein and Nucleic Acid

Experiment 5 Cellulose Acetate Membrane Electrophoresis for Serum Proteins

Experiment 6 Vertical Plate Polyacrylamide Gel Electrophoresis for Serum Proteins

Experiment 7 Agarose Gel Electrophoresis for DNA

第四章 电泳技术

一、电泳的基本原理

二、电泳的分类

三、常用的电泳技术

四、蛋白质与核酸的染色方法

实验五 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳

实验六 血清蛋白质垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验七 DNA的琼脂糖凝胶电泳

Chapter 5 Determination of Enzyme Activity and Enzymatic Analysis

5.1 Determination ofEnzyme Activity

5.2 Enzymatic Analysis

Experiment 8 Determination of Alkaline Phosphatase Activity in Serum(Disodium Phenyl Phosphate Method)

Experiment 9 Serum Glucose Test(GOD／POD Method)

Experiment 10 Competitive Inhibition Test ofSuccinate Dehydrogenase

第五章 酶活力测定与酶法分析

一、酶活力测定

二、酶法分析

实验八 血清碱性磷酸酶活力的测定（磷酸苯二钠法）

实验九 血清葡萄糖浓度的测定（GOD-POD法）

实验十 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制

Chapter6 Clinical BiochemistryTests

6.1 Determination ofProteins in Serum

Experiment 11 Determination of Total Proteins in Serum(Biuret Method)

Experiment 12 Determination of Albumin in Serum(Bromocresol Green Method，BCG Method

6.2 Determination ofBlood Glucose in Serum

Experiment 13 Serum Glucose Test(o-Toluidine Method)

Experiment 14 Oral Glucose Tolerance Test(OGTT)

Experiment 15 Influence ofInsulin and Adrenaline on Blood Glucose

6.3 Determination ofBlood Lipid

Experiment 16 Determination of Triacylglycerol in Serum(GPO—PAP Method)

Experiment 17 Determination of Total Cholesterol in Serum(Cholesterol Oxidase Method

Experiment 18 Determination of High—density Lipoprotein Cholesterol(HDL-Ch)in Plasma

6.4 Liver Function Tlests

Experiment 1 9 Determination of Glutamic Pyruvic Transaminase Activity in Serum(Modified Reitman Methodl

Experiment 20 Determination of Total Bihrubin and Direct Bflirubin in Serum(Modified J—G Method)

6.5 Kidney Function Tests

Experiment 21 Determination of Urea in Serum Urase Method)

Experiment 22 Determination of Uric Acid in Serum(Uricase Method)

第六章 临床常用生物化学检验

一、血清蛋白质含量的测定

实验十一 血清总蛋白的测定（双缩脲法）

实验十二 血清白蛋白的测定（溴甲酚绿法）

二、血清葡萄糖含量的测定

实验十三 血清葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）

实验十四 口服葡萄糖耐量试验（OGTT）

实验十五 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响

三、血清脂类物质的测定

实验十六 血清三酰甘油的测定（GPO-PAP法）

实验十七 血清总胆固醇的测定（胆固醇氧化酶法）

实验十八 血浆高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-Ch）的测定

四、肝功能的相关检测

实验十九 血清谷丙转氨酶活力的测定（改良赖氏法）

实验二十 血清总胆红素和直接胆红素的测定（改良I-G法）

五、肾功能的相关检测

实验二十一 血清尿素的测定（脲酶比色法）

实验二十二 血清尿酸的测定（酶偶联法）

Chapter 7 Purification and Identification of Albumin in Serum

Experiment 23 Salting-Out&Desalination Using Sephadex G-25 Gel Chromatography

Experiment 24 DEAE-Cellulose Ion Exchange Chromatography

Experiment 25 Quantitative Determination of Protein(Coomassie Brilliant Blue G-250 Staining Method

Experiment 26 SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis(SDS—PAGE)

第七章 血清白蛋白的纯化与鉴定

实验二十三 盐析与葡聚糖凝胶G-25凝胶层析脱盐

实验二十四 DEAE-纤维素离子交换层析

实验二十五 蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）

实验二十六 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）

Chapter 8 Recombinant DNA Construction and ProkaryoUc Expression in E.coil

Experiment 27 Human DNA Extraction from Peripheral Blood Leukocyte

Experiment 28 DNA Extraction from Medicinal Plant

Experiment 29 Gene Amplification by PCR

Experiment 30 Minipreparation of Plasmid DNA(Alkaline Lysis Method)

Experiment 31 Double Enzyme Digestion for Target Gene and Vector

Experiment 32 The Ligation ofTarget Gene and Vector

Experiment 33 Preparation.Transformation and Screening of Competent E. coli Cells

Experiment 34 Induced Expression of Exogenous Genes in E coli and Detection by SDS-PAGE

Experiment 35 Detection ofExpressed Protein by Western Blotting Method

第八章 重组DNA的构建及其在大肠埃希菌中的诱导表达

实验二十七 人外周血白细胞DNA的提取

实验二十八 药用植物DNA的提取

实验二十九 目的基因的PcR扩增

实验三十质粒DNA的小量快速提取（碱裂解法）

实验三十一 目的基因与载体的限制性双酶切

实验三十二 目的基因片段与载体的连接

实验三十三 大肠埃希菌感受态细胞的制备、转化与筛选

实验三十四 外源基因在大肠埃希菌中的诱导表达和SDS-PAGE检测

实验三十五 蛋白质印迹法检测表达蛋白

附录 常用生物化学仪器使用方法

Ⅰ 721E型分光光度计

Ⅱ HD-3型紫外检测仪

Ⅲ BSZ-100型自动部分收集器

Ⅳ LM17型记录仪

Ⅴ DYY-6C型电泳仪

Ⅵ Adventurer系列电子天平

Ⅶ H-1650型离心机

Ⅷ PTC-150型PCR仪

参考文献

《医学生物化学与分 子生物学实验教程（双语版）》以英／中双语的形式 较全面、系统地介绍了生物化学与分子生物 学常用的实验理论与技术，主要包括：量器的使用、 校正与实验数据的处 理，分光光度技术，层析技术，电泳技术，酶活力测 定与酶法分析，临床常用 生物化学检测方法等。在每种实验技术理论介绍之后 都附有与之对应的 基本技能实验。在基本技能实验的基础上，本书还编 写了血清白蛋白的纯 化与鉴定、重组DNA的构建及其在大肠埃希菌中的诱 导表达等综合性实 验，并介绍了一些常用生物化学仪器的使用方法。
　　本书特点：①英／中双语；②以“问题”为中心 ，书中的实验技术理论都 以问题的方式展开，引导学生带着问题学习，通过探 寻解决问题的方法，加 深学生对相关实验理论和技术的认识。
　　本书可作为医学院校各专业本科生、留学生和硕 士研究生的实验指导 教材，也可供有关教师和科研技术人员参考使用。