核酸分子杂交技术

第一章核酸的分子结构与分子杂交的基本原理1

第一节发现核酸1

第二节核酸的分子结构5

一、核苷酸的结构5

二、DNA的分子结构9

三、RNA的分子结构18

第三节核酸分子杂交的基本原理及在医学中的应用21

一、DNA的变性23

二、DNA的复性25

三、核酸杂交在医学中的应用简介27

参考文献27

第二章核酸分子杂交的类型28

第一节固相核酸分子杂交类型28

一、菌落原位杂交（colonyinsituhybridization）28

二、斑点杂交（dotblot）29

三、Southern印迹杂交（Southernblot）30

四、Northern印迹杂交（Northernblot）31

五、组织原位杂交（tissueinsituhybridization）32

六、固相夹心杂交35

七、其他固相杂交类型35

八、固相核酸杂交的几点说明36

第二节液相核酸分子杂交类型36

一、吸附杂交36

二、发光液相杂交37

三、液相夹心杂交37

四、复性速率液相分子杂交38

参考文献38

第三章核酸探针的种类、标记及检测39

第一节核酸探针的种类40

一、DNA探针40

二、CDNA探针41

三、RNA探针41

四、寡核苷酸探针42

第二节核酸探针的标记和检测43

一、放射性同位素核酸探针的标记和检测44

二、非放射性核酸探针的标记和检测47

参考文献49

第四章核酸分子杂交实验因素的优化50

一、探针的选择50

二、探针的标记方法51

三、探针的浓度51

四、杂交率52

五、杂交最适温度52

六、杂交的严格性53

七、杂交反应时间54

八、杂交促进剂55

参考文献55

第五章斑点杂交56

一、概述56

二、杂交方法57

三、斑点杂交的应用61

参考文献63

第六章Southern印迹杂交64

第一节Southern印迹杂交的基本原理64

一、DNA从凝胶到膜上的转移方法64

二、Southern杂交膜67

三、核酸探针的标记68

第二节Southern印迹法的基本过程70

一、DNA样品的酶切和电泳70

二、准备用于转移的凝胶72

三、DNA从琼脂糖凝胶转移到固相支持物73

四、探针标记74

五、杂交75

六、洗膜77

七、杂交结果的检测77

八、杂交膜的重复使用78

九、注意事项78

十、杂交严谨性80

第三节Southern杂交的应用进展81

参考文献85

第七章Northern印迹杂交86

第一节Northern印迹杂交的基本原理86

第二节杂交方法88

一、RNA电泳88

二、将变性RNA转移至尼龙膜92

三、杂交和结果检测96

四、杂交结果的分析100

第三节Northern杂交的应用与进展101

一、反向Northern杂交和Northern杂交筛选mRNA表达101

二、高通量反向Northern印迹杂交和Northern杂交102

参考文献105

第八章原位杂交106

第一节原位杂交组织化学技术的由来及发展106

第二节原位杂交技术的基本方法108

一、玻片准备和组织固定109

二、样品的预处理110

三、预杂交110

四、杂交111

五、杂交后的清洗112

六、免疫学检测112

七、观察结果115

第三节原位杂交的影响因素116

一、影响杂交的主要因素116

二、影响杂交的其他因素118

第四节探针标记120

一、探针标记的直接法和间接法120

二、半抗原标记120

三、标记方法124

四、地高辛、生物素或荧光染料标记探针125

第五节荧光原位杂交137

一、FISH技术的发展史138

二、FISH技术操作140

三、FISH的应用146

四、FISH技术的进展149

参考文献153

第九章菌落原位杂交154

一、小量细菌克隆的原位杂交筛选155

二、中等量细菌克隆的原位杂交筛选菌落155

三、大量细菌克隆的原位杂交筛选157

四、菌落的裂解及DNA结合于滤膜158

五、与菌落的影印滤膜进行杂交159

参考文献160

第十章DNA芯片技术162

第一节生物芯片与DNA芯片162

一、生物芯片与DNA芯片的概念163

二、DNA芯片的主要类型164

第二节DNA芯片技术的基本原理与方法165

一、芯片的制备165

二、样品的准备169

三、分子杂交169

四、检测分析171

第三节DNA芯片技术的应用概况171

一、DNA序列分析172

二、基因突变检测173

三、基因表达谱分析174

四、基因组研究174

五、基因诊断176

六、药物研究与开发176

七、其他领域177

参考文献177

常用缓冲溶液的配制178

　　本书旨在全面而概要地介绍核酸杂交技术的基本原理、主要技术环节、主要核酸分子杂交类型的具体操作程序、基本应用及相关进展。适合初学者快速把握核酸杂交技术的基本原理，也可供有关研究人员参考。全书共十章。第一章主要介绍核酸的分子结构与核酸分子杂交的基本原理，可谓基础中的基础；第二章至第四章是分别从不同的角度介绍核酸杂交概况，包括核酸杂交类型、核酸探针以及影响核酸杂交的各种因素，这些内容在后面各章中必要时会有更深入的介绍。第五章至第十章则是分别介绍目前主要的核酸杂交类型，包括斑点杂交、Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、原位杂交、菌落原位杂交及DNA芯片技术。每章均较为全面地介绍相关杂交所涉及的原理、操作步骤、基本应用及相关进展。每章均附参考文献便于读者进一步追踪索引。本书可作为分子生物学、生物技术、医学、农学等专业领域的高等院校教师、本科生、研究生的实验参考用书，也适合上述领域的科研人员参考阅读。　　核酸分子杂交技术作为最基本、最常用的一种分子生物学方法技术，已经普遍应用于生命科学基础研究的各个领域。本书详细介绍了目前核酸分子杂交技术中几种常用的类型，包括斑点杂交、Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、原位杂交、菌落原位杂交、DNA芯片技术等。本书最突出的特点在于介绍各种核酸分子杂交技术时尽量做到言简意赅、通俗易懂，只概要地介绍基本原理，但突出论述技术要领、主要技术环节、具体操作程序，以及相关实验因素的优化，并对相关进展做了简要阐述，旨在使初学者快速把握核酸杂交技术。