细胞生物学层次化实验指导

第一章　基本型实验 1

第一节　细胞的形态、结构观察及组成显示 1实验1　血细胞装片及涂片的制备及染色观察 2实验2　植物细胞的叶绿体、线粒体及液泡观察 6实验3　蟾蜍胸骨剑突软骨细胞高尔基体的中性红染色 7实验4　马铃薯和花生徒手切片的制备及细胞内多糖、脂肪的染色 8实验5　孚尔根法显示细胞中的 DNA 10实验6　甲基绿Ｇ派洛宁染色法显示细胞中的 DNA和 RNA 11实验7　考马斯亮蓝染色法显示洋葱鳞茎内表皮及巨噬细胞的细胞骨架

13实验8　酸性磷酸酶法显示巨噬细胞溶酶体 16实验9　细胞中过氧化物酶体的显示 18实验10　酶免疫细胞化学法显示人 T细胞表面CD3分子 19实验11　细胞大小的显微测量 21　第二节　细胞计数 23实验12　细胞计数 23　第三节　细胞生理 25实验13　哺乳动物红细胞膜的通透性检测 26实验14　植物细胞质壁分离现象观察及质壁分离法测定基态渗透值 27实验15　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察及吞噬活性检测 29实验16　台盼蓝染料排除法检测活细胞比率 32

第四节　细胞分裂 33实验17　压片法制备植物组织细胞分裂标本片及分裂各期细胞特征观察

34实验18　滴片法制备动物细胞分裂标本片及细胞分裂指数分析 35　第五节　细胞裂解及效果检测 38实验19　小鼠腹水瘤细胞裂解及乳酸脱氢酶活性检测 39　第六节　细胞器的分离 40实验20　植物细胞叶绿体的分离 41

实验21　动物细胞线粒体的分离 43

第七节　细胞融合 45实验22　PEG介导的细胞融合 46

参考及拓展阅读文献 47

第二章　综合型实验 49

第一节　细胞的分离与分选 49实验23　密度梯度离心法分离血液单个核细胞 50实验24　免疫磁珠分选法分离小鼠脾脏CD4＋T淋巴细胞 52实验25　T细胞的免疫荧光标记及流式细胞仪分选 54

第二节　细胞培养 56实验26　贴壁细胞的原代培养 58实验27　贴壁细胞的传代培养 61实验28　细胞冻存与解冻复苏 63实验29　动物外周血细胞培养及染色体制备 66

第三节　细胞增殖及细胞活力检测 68实验30　MTT比色法检测细胞增殖与活力 68实验31　CCKＧ8法检测细胞增殖与活力 70

第四节　细胞黏附与迁移分析 71实验32　肿瘤细胞黏附能力分析 72实验33　检测肿瘤细胞侵袭能力的 TrAnswel

小室实验 74实验34　肿瘤细胞迁移的划痕实验 (woundscrAtchAs

Ay) 75

第五节　细胞的激活及信号转导分子检测 76实验35　利用钙离子荧光探针检测细胞内 CA2＋浓度 77实验36　信号蛋白磷酸化水平检测 79实验37　转录因子NFＧκB活性检测 82

第六节　哺乳动物细胞转基因及表达检测 84实验38　绿色荧光蛋白基因转染体外培养的小鼠成纤维细胞及表达检测 85

第七节　细胞周期调控及检测 87实验39　利用流式细胞术分析细胞周期时相 88实验40　细胞周期蛋白D1基因转染细胞及细胞周期检测 91实验41　胸腺嘧啶脱氧核苷 (TdR)双阻断法同步化培养动物细胞 93实验42　秋水仙胺阻抑法分离贴壁培养的哺乳动物 M期细胞 95实验43　植物细胞中期同步化诱导 97

参考及拓展阅读文献 98

第三章　开放探索型实验 102　第一节　细胞凋亡及胀亡的诱导及检测 102实验44　凋亡细胞及胀亡细胞的形态学检测 102实验45　An nexinVＧFITC /PI双染色法检测凋亡与胀亡细胞 104实验46　凋亡细胞 DNA的电泳检测 107

实验47　TUNEL技术原位检测凋亡细胞 DNA断裂 110　第二节　细胞自噬的诱导及检测 113

实验48　MDC染色法检测巨噬细胞自噬现象 114

实验49　 GFPＧLC3基因转染法显示自噬体 115　第三节　细胞衰老的诱导与检测 117

实验50　细胞 ROS的流式细胞仪检测 118

实验51　H2O2诱导细胞衰老及胞内衰老相关的 βＧ半乳糖苷酶检测 120　第四节　细胞分化的诱导及检测 123

实验52　骨髓造血干细胞的诱导分化 124

实验53　视黄酸诱导肿瘤细胞分化及检测 128　第五节　小干扰 RNA引起的基因沉默 130

实验54　RNA干扰沉默绿色荧光蛋白基因 130　第六节　细胞端粒酶活性检测 133

实验55　肿瘤细胞的端粒酶活性检测 133　参考及拓展阅读文献 136

附录一　本书常用溶液配制方法 139附录二　腹水瘤小鼠模型建立方法 141附录三　细胞培养前的准备工作 142

细胞生物学层次化实验指导由南京大学多年从事细胞生物学理论与实验教学的教师编写.共收录55个有代表性的细胞生物学实验,依据类型、难度、用时等特点对实验内容进行了归类和编排,分为三章.第一章编写了22个基本型实验,涉及细胞的形态、结构观察及组成显示,细胞计数,细胞生理,细胞分裂,细胞裂解及效果检测,细胞器的分离及细胞融合;第二章为21个综合型实验,包括细胞的分离与分选、细胞培养、细胞增殖及细胞活力检测、细胞黏附与迁移分析、细胞的激活及信号转导分子检测、哺乳动物细胞转基因及表达检测、细胞周期调控及检测;第三章为12个开放探索型实验,涉及细胞凋亡及胀亡的诱导及检测、细胞自噬的诱导及检测、细胞衰老的诱导与检测、细胞分化的诱导及检测、小干扰RNA 引起的基因沉默、细胞端粒酶活性检测.此外,还有附录介绍常用溶液的配制、腹水瘤小鼠模型的建立和细胞培养前的准备工作,并附细胞生物学层次化实验指导部分实验结果彩图.