生物技术制药实验指南

第一章 实验室管理和安全准则

一、实验室一般要求

二、生物技术实验室规则

三、生物技术实验室的安全管理与注意事项

四、实验室意外事故的紧急处理

第二章 生物技术实验常用仪器及操作规范

一、玻璃器皿

二、塑料制品

三、过滤装置

四、微量移液器及吸头

五、pH计

六、天平

七、离心机

八、恒温箱

九、振荡设备

十、超净工作台

十一、生物安全柜

十二、纯水仪

十三、灭菌设备

十四、紫外-可见分光光度计

十五、热循环仪

十六、电泳仪

十七、凝胶成像系统

十八、流式细胞仪

十九、超声细胞破碎仪

二十、制冰机

二十一、液氮罐

二十二、冰箱

二十三、真空离心浓缩仪

二十四、基因枪

二十五、新一代高通量测序技术

第三章 显微观察技术

一、普通光学显微镜

二、相差显微镜

三、倒置显微镜

四、荧光显微镜

五、激光扫描共聚焦显微镜

六、透射电子显微镜

七、扫描电子显微镜

实验一 细菌显微形态特征观察

实验二 丝状真菌显微形态特征观察

实验三 酵母菌显微形态特征观察

实验四 酵母细胞大小和数量的测定

第四章 缓冲液、培养基的配制及灭菌技术

一、溶液的配制

二、化学品和废弃缓冲液的处理

三、仪器

实验一 MS培养基的配制

实验二 LB培养基的配制

第五章 核酸分析技术

一、储存

二、纯化-除去核酸中的蛋白质

三、核酸的定量

四、浓缩沉淀

五、DNA酶切反应

六、DNA连接

七、电泳

八、聚合酶链式反应

实验一 碱裂解法提取质粒DNA

实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳

实验三 细菌基因组DNA的提取和鉴定

实验四 酿酒酵母总DNA的提取

实验五 植物基因组DNA提取

实验六 动物组织DNA的提取

实验七 采用Trizol溶液提取细菌总RNA

实验八 动物组织mRNA的提取

实验九 DNA的酶切

实验十 DNA的连接

实验十一 脉冲场凝胶电泳（PFGE）

实验十二 RNA琼脂糖变性胶电泳分析

实验十三 真菌ITS序列的PCR扩增

实验十四 菌落PCR

实验十五 DD-PCR技术

实验十六 实时定量PCR

实验十七 Southem印迹杂交

实验十八 Northem杂交技术

实验十九 原位杂交

第六章 蛋白分析技术

一、选择沉淀

二、蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳

三、双向凝胶电泳

四、蛋白浓度检测

实验一 植物中叶片蛋白质的提取

实验二 动物组织蛋白质的提取

实验三 蛋白质的定量（BCA法）

实验四 蛋白质SDS-PAGE电泳

实验五 蛋白质双向电泳

实验六 Western Blotting

实验七 酶联免疫吸附实验

实验八 免疫组化实验

第七章 组织与细胞培养技术

一、动物组织培养

二、植物组织培养

实验一 哺乳动物细胞的原代培养

实验二 哺乳动物细胞的传代培养

实验三 哺乳动物细胞的冻存与复苏

实验四 哺乳动物细胞的融合

实验五 兔脾细胞悬液的制备

实验六 小鼠脾细胞培养实验

实验七 胡萝卜愈伤组织的培养

实验八 植物原生质体的制备

实验九 原生质体分离与融合

第八章 微生物培养

一、细菌培养

二、真核微生物的培养

实验一 药植土壤中根际微生物的分离与计数

实验二 细菌生长曲线的测定

实验三 酿酒酵母海藻酸钙的细胞固定化

第九章 转基因技术

一、细菌转基因

二、酵母菌转基因

三、植物转基因

四、动物转基因

实验一 CaCl2法制备感受态细胞

实验二 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞

实验三 电转化法制备细菌感受态细胞

实验四 基因枪法转化油莱愈伤组织

实验五 农杆菌介导的植物遗传转化

实验六 逆转录病毒感染法制备转基因细胞

实验七 显微注射法制备转基因小鼠

第十章 诱变技术

实验一 大肠杆菌的紫外诱变

实验二 氨基酸营养缺陷型突变株的筛选

第十一章 生物活性物质的分离与检测

实验一 抗生素的微生物检定法

实验二 牛乳中酪蛋白的制备

实验三 γ-球蛋白的分离

实验四 大蒜SOD的分离提取与活力测定

实验五 滑菇多糖的提取制备和鉴定

实验六 凝血酶的制备

第十二章 综合实验

实验一 基因组DNA文库的构建

实验二 突变细胞基因差异表达的研究

附录

主要参考文献

随着生物医药研究的迅猛发展，生物技术药物在新药开发中占有越来越重要的位置，也是当今各大医药企业重点关注的药物研究领域。《生物技术制药实验指南》主要介绍了生物技术制药实验的基本仪器特点与使用、基本实验操作方法及注意事项，并在最后设计了综合性实验，以供读者全面掌握生物技术药物实验研究的方法及应用。全书共分十二章，分别介绍了生物技术制药实验室准则、常用仪器及操作规范、显微观察技术、灭菌技术、核酸分析技术、组织与细胞培养技术、微生物培养技术、转基因技术、诱变育种技术、生物活性物质的分离检测技术和综合性实验。