现代蛋白质实验技术

第一部分 蛋白质鉴定

实验一 SDS-PAGE测定蛋白质分子质量

实验辅助说明1:SDS一样品缓冲液及蛋白质样品处理

实验二 SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳

实验辅助说明2:蛋白质分子质量标准

实验三 利用非变性凝胶电泳分析蛋白质寡聚体

实验辅助说明3:电泳干胶制备

实验四 血清蛋白的聚丙烯酰胺凝胶双向电泳分析(非预制胶)

实验辅助说明4:预制胶条

实验五 利用凝胶阻滞实验(EMSA)分析转录因子

实验辅助说明5:生物素化与亲和素

实验六 凝胶过滤层析法鉴定蛋白质分子质量

实验辅助说明6:层析凝胶使用后的长期保存

实验七 MALDl-TOF-MS质谱法鉴定蛋白质

实验辅助说明7:质谱分析用蛋白质样品制备注意事项

实验八 叶绿素蛋白复合物的提取与光谱学测定

实验辅助说明8:激发光谱与发射光谱

实验九 微丝结合蛋白的结合常数测定

实验十 肌动蛋白聚合动力学分析(光散射法)

实验十一 蛋白质浓度(或含量)的测定

第二部分 蛋白质表达与分离纯化

实验十二 His-tag融合蛋白的原核表达及纯化

实验辅助说明9:抗原决定簇在重组蛋白中的应用

实验辅助说明10:Ni2+亲和填料的再生与保存

实验十三 His-tag融合蛋白可溶性表达的快速微量检测

实验辅助说明11:包涵体蛋白的复性

实验辅助说明12:常见蛋白酶抑制剂的使用与保存

实验十四 绿色荧光蛋白的重组表达与纯化

实验辅助说明13：GFP的金属离子螯合层析纯化

实验十五 蛋白质重组表达的可视化定量方法

实验辅助说明14：菌体的不同裂解方法

实验十六 GST融合蛋白的表达与亲和纯化

实验辅助说明15：用蛋白酶切除蛋白标签

实验十七 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达外源蛋白

实验辅助说明16：昆虫细胞培养

实验十八 PEG介导拟南芥叶肉原生质体中外源蛋白的瞬时表达

实验辅助说明17：常用荧光蛋白分子波长特性

实验十九 亲和层析法分离青豌豆凝集素

实验辅助说明18：透析袋的处理

实验辅助说明19：微升量级蛋白质样品的透析

实验二十 蛋白质离子交换层析

实验辅助说明20：离子交换剂的种类与再生

实验二十一 DNA亲和柱的制备和DNA结合蛋白的纯化

实验辅助说明21：蛋白质电泳胶的银染色法

实验二十二 利用蔗糖密度梯度超速离心分离蛋白质

实验辅助说明22：连续性蔗糖密度梯度制备

实验二十三 猪脑微管蛋白的制备

实验二十四 兔骨骼肌肌动蛋白的制备

实验二十五 蛋白质结晶--悬滴法

实验辅助说明23：载片的硅烷化

实验辅助说明24：座滴法和三明治滴法培养蛋白质晶体

实验二十六 蛋清溶菌酶的纯化以及结晶

实验辅助说明25：蛋清中主要蛋白的特性

第三部分 酶活性分析

实验二十七 果实菠萝蛋白酶的凝胶过滤纯化与活性分析

实验二十八 果实菠萝蛋白酶动力学常数的测定

实验二十九 激酶与底物的体外磷酸化测定

实验辅助说明26：放射性同位素在生物学研究中的应用及辐射防护

……

第四部分 蛋白质免疫化学与蛋白质互作

附录一 蛋白质分子质量标准

附录二 硫酸铵饱和度常用表

附录三 常用缓冲液的配制

附录四 层析填料

附录五 细胞破碎方法

《现代蛋白质实验技术》有以下几个特点：①实验项目内容充实，技术先进。所选实验项目主要来自编写者多年的教学经验和科研积累，除传统蛋白质实验技术如SDS-PAGE、免疫印迹、双向电泳、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、酶动力学分析等外，还包括凝胶阻滞电泳、质谱技术、酵母双杂交、Pull—down、Far—western、双分子荧光互补、蛋白质体外磷酸化、蛋白质结晶、抗体纯化、药物筛选等。②实验技术信息量丰富，参考价值高。书中除了39个实验项目外，还有针对性地编写了33个实验辅助说明穿插在有关实验中，如微升量级样品的透析、杂交膜的选择、常见蛋白酶抑制剂的使用与保存、包涵体蛋白的复性、融合标签的切割、Ni填料的再生、显色后NC膜上蛋白质条带的再利用、免疫印迹中的ECL检测法、激发光谱与发射光谱等。③内容编写精练、易懂，实用性强。《现代蛋白质实验技术》编者为具有多年实验教学经验的教师和掌握蛋白质先进技术的科研人员，其通力合作保证了实验教材的编写质量。该书适合作为生命科学专业高年级本科生实验教材，也适合生命科学相关专业研究生使用。