分子生物学实验技术

第一章细胞培养技术1

第一节细胞培养的基本原理与技术1

第二节细胞培养的方法6

第三节体外培养细胞的观察9

第四节培养细胞增殖动力学14

第五节细胞的冻存、复苏与运输17

第二章DNA分析技术19

第一节真核细胞基因组DNA的提取19

第二节DNA的限制性内切酶消化22

第三节DNA的凝胶电泳30

第四节DNA的Southern印迹杂交分析43

第三章RNA分析技术49

第一节从组织或培养的细胞中分离RNA49

第二节从新鲜和冰冻血液中提取RNA53

第三节逆转录PCR技术54

第四节Northern印迹杂交技术56

第五节RNA狭缝印迹分析60

第六节RNase保护测定法61

第七节mRNA的引物延伸分析64

第八节RNAi技术路线选择及应用68

第四章核酸探针的制备与标记73

第一节基本概念73

第二节探针的核素标记79

第三节非放射性探针标记84

第四节探针的纯化和测定87

第五章聚合酶链反应91

第一节基本PCR技术91

第二节PCR反应条件的优化93

第三节RT??PCR反应96

第四节应用T?苍靥蹇寺?PCR产物99

第五节差异显示PCR100

第六节免疫PCR105

第七节PCR??ELISA108

第六章基因克隆技术110

第一节基因克隆技术基本概念110

第二节体外连接方法117

第三节重组DNA转化宿主细胞120

第四节重组子的筛选和鉴定123

第七章外源基因在哺乳动物细胞中的表达129

第一节外源基因导入哺乳动物细胞中的技术方法129

第二节病毒载体介导的基因转移134

第三节报告基因的表达及检测142

第八章DNA与蛋白质的相互关系148

第一节细胞核蛋白的提取148

第二节凝胶滞后实验149

第三节干扰试验153

第四节染色质免疫沉淀实验156

第九章蛋白质分析技术159

第一节蛋白质的提取及浓度测定159

第二节蛋白质检测及鉴定技术163

第三节蛋白质的Western印迹分析166

第四节新的蛋白质检测技术171

第十章网络资源在分子生物学中的应用178

第一节生物信息学的概念178

第二节生物信息数据库及查询178

第三节基因电子克隆的基本思路186

第四节核酸与蛋白质序列分析187

第五节基因表达谱分析191

第六节实验室常用生物学软件193

第十一章动物模型201

第一节实验动物概述201

第二节常用大、小鼠品系介绍203

第三节动物模型204

第四节实验动物的给药途径、方法和给药量计算方法207

第五节实验动物全身麻醉的常用方法及剂量213

第六节实验动物体液采集与脏器活检214

第七节实验动物的脏器活检218

附录223

一、 实验常用器材处理223

二、 Tris饱和酚的配制224

三、 常用的缓冲液和试剂224

四、 常用酶的配制230

五、 细菌培养基和抗生素231

六、 核素资料233

七、 核酸及蛋白质数据234

八、 常用分子量标准参照物236

九、 分子生物学常用英语词汇238

参考文献269