生物化学与分子生物学实验技术教程

第二版前言

第一版前言

第一章生物化学与分子生物学中的定量分析

第一节滴定分析法

一、基本原理

二、标准溶液

三、滴定分析的计算

四、减小滴定误差的方法

第二节紫外可见分光光度法

一、基本原理

二、分光光度计的主要部件

三、分光光度法的定性和定量

四、减小测定误差的方法

第三节荧光分析法

一、基本原理

二、荧光仪的主要部件

三、荧光分析法的定性和定量

四、减小测量误差的方法

第四节酶活力及动力学数据的测定

一、酶活力的测定

二、Km和Vmax的测定

三、其他动力学数据的测定

实验1-1粗脂肪的提取和定量测定

实验1-2碘价的测定(Hanus法)

实验1-3皂化价的测定

实验1-4酸价的测定

实验1-5脂肪乙酰价的测定

实验1-6蛋白质的测定(凯氏定氮法)

实验1-72，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量

实验1-8碘量法测定维生素C的含量

实验1-9血糖定量测定(GOD-PAP法)

实验1-10蒽酮比色定糖法

实验1-113，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量

实验1-12血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)

实验1-13血清总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法)

实验1-14双缩脲法测定蛋白质含量

实验1-15Folin试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量

实验1-16考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量

实验1-17紫外吸收法测定蛋白质含量

实验1-18紫外吸收法测定核酸含量

实验1-19二苯胺显色法测定DNA含量

实验1-20地衣酚显色法测定RNA含量

实验1-21定磷法测定核酸含量

实验1-22荧光法测定维生素B2含量

实验1-23血清丙氨酸氨基移换酶(ALT)的测定

实验1-24酸性磷酸酯酶的测定

实验1-25碱性磷酸酶的反应动力学性质

第二章生物大分子的提取、沉淀和离心分离

第一节生物大分子的提取

一、材料的选择与处理

二、确定测定方法

三、细胞的破碎

四、抽提

第二节沉淀分离技术

一、蛋白质的沉淀分离

二、核酸的提取与沉淀分离

三、多糖和小分子活性成分的提取和分离

第三节膜分离技术

一、膜分离技术的分类

二、膜的分类和性质

三、膜的特性

四、透析

五、微滤、超滤和反渗透

第四节提取物的浓缩、结晶和干燥

一、浓缩

二、结晶

三、干燥

第五节离心分离技术

一、离心机的种类与用途

二、离心分离方法的选择

三、离心条件的确定

四、离心操作的注意事项

实验2-1香菇多糖的制备

实验2-2卵磷脂的制备

实验2-3大蒜细胞SOD的提取与分离

实验2-4菜花(花椰菜)中核酸的分离和鉴定

实验2-5酵母RNA的提取与分离

实验2-6从肝脏中提取DNA

实验2-7大肠杆菌细胞膜的分离

实验2-8大鼠肝细胞核的分离

第三章层析技术

第一节吸附层析

一、吸附柱层析

二、聚酰胺薄膜层析

第二节分配层析

一、概述

二、纸层析

第三节凝胶层析

一、基本原理

二、凝胶的选择

三、操作

第四节离子交换层析

一、基本原理

二、离子交换剂

三、操作

第五节亲和层析

一、配基与偶联凝胶的选择与处理

二、亲和层析的操作条件

第六节薄层层析

一、支持剂的选择与处理

二、薄层板的制作

三、层析方法

第七节气相色谱

一、基本原理

二、气相色谱的气路系统

三、色谱柱

四、检测器

五、定性和定量方法

第八节高效液相色谱

一、概述

二、HPLC的特点

三、HPLC的分类

四、HPLC的仪器构成

五、定性定量方法

实验3-1氨基酸的纸层析

实验3-2微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸

实验3-3核苷酸的离子交换层析

实验3-4DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析

实验3-5凝胶层析测定蛋白质的Mr

实验3-6胰蛋白酶的亲和层析

实验3-7醇酯成分的气相层析

实验38HPLC法测定生物类黄酮含量

实验39HPLC法测定维生素A含量

第四章电泳技术

第一节基本原理

一、泳动度

二、影响泳动度的因素

第二节乙酸纤维素薄膜电泳

第三节琼脂糖凝胶电泳

一、琼脂糖凝胶的特点

二、DNA的琼脂糖凝胶电泳

三、印迹转移电泳

四、交变脉冲电场凝胶电泳

第四节聚丙烯酰胺凝胶电泳

一、聚丙烯酰胺凝胶的特点

二、凝胶聚合的原理及有关特性

三、PAGE原理

四、SDS-PAGE原理

五、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理

六、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理

第五节高效毛细管电泳

一、基本原理

二、实验方法

三、分离类型及应用

第六节免疫分析技术

一、抗体的性质和制备

二、抗原抗体反应

实验4-1血清蛋白的乙酸纤维素薄膜电泳

实验4-2垂直板PAGE分离血清蛋白

实验4-3SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量

实验4-4等电聚焦电泳测定血清蛋白质等电点

实验4-5DNA的琼脂糖凝胶电泳

实验4-6PAGE分离RNA

实验4-7对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白

实验4-8火箭免疫电泳法测定抗原含量

第五章分子生物学基本技术

第一节DNA的体外合成

一、DNA的化学合成

二、聚合酶链反应技术

第二节核酸的分子杂交

一、探针的种类与选择

二、标记物的选择

三、探针的放射性同位素标记

四、探针的非放射性标记

五、膜上印迹杂交的条件选择

六、杂交信号的检测

七、DNA芯片技术及应用

第三节基因克隆

一、目的基因的来源

二、常用的克隆载体

三、DNA分子的体外连接

四、重组子导人受体细胞

五、重组子的筛选

六、基因组文库的构建

七、cDNA文库的构建

第四节基因表达

一、原核生物的表达载体

二、用于原核细胞表达的外源基因

三、提高表达水平的措施

四、外源基因在酵母细胞中的表达

五、外源基因在昆虫杆状病毒中的表达

六、外源基因在哺乳动物细胞中的表达

第五节转基因植物和转基因动物

一、转基因植物

二、转基因动物

第六节基因组学的研究方法

一、核酸的序列测定

二、结构基因组学

三、功能基因组学

第七节转录调控研究技术

一、基因功能状态的研究方法

二、顺式作用元件与反式作用因子的分析方法

实验5-1植物基因组DNA的提取

实验5-2动物基因组DNA的提取

实验5-3细菌基因组DNA的提取

实验5-4质粒DNA的提取

实验5-5大肠杆菌的转化

实验5-6质粒DNA的酶切及电泳鉴定

实验5-7质粒DNA的分子杂交

实验5-8使用光敏生物素探针的Southern杂交

实验5-9DNA重组

实验5-10聚合酶链式反应(PCR)

实验5-11外源基因在大肠杆菌中的诱导表达

第六章综合性实验和设计性实验

实验6-1溶菌酶的分离纯化

实验6-2超氧化物歧化酶的分离纯化和同工酶分析

实验6-3利用PCR差异显示mRNA

实验6-4cDNA文库的构建

实验6-5蛋白质印迹分析

实验6-6蛋白质的双向凝胶电泳

附录一实验数据的处理

附录二调整硫酸铵溶液饱和度计算表(25℃)

附录三换算转速、相对离心力和转子半径的列线图

附录四常见生化物质电泳后的染色方法

附录五常用缓冲液的配制

参考书目

　　本书是“21世纪高等院校教材”之一，全书共分6个章节，主要对生物化学与分子生物学的实验技术原理作了全面、系统地讲述，具体内容包括生物化学与分子生物学中的定量分析、层析技术、电泳技术、分子生物学基本技术等。该书可供各大专院校作为教材使用，也可供从事相关工作的人员作为参考用书使用。　　本书前5章按照实验技术自身的体系，全面系统地讲述了生物化学与分子生物学的实验技术原理，并将61个难度不等的实验按技术类别分列于5章中，可供不同条件的学校选做。第六章介绍了开设综合性实验和设计性实验的目标、方法及设计性实验的实施方案，编入6个难度适中的综合性实验。　　本书适于用作教材，将生物化学与分子生物学实验技术独立设课，通过讲解、操作结合的模式，对生命科学各专业本科生和部分专业硕士研究生进行系统的生物化学与分子生物学技术训练，也可供有关科技人员参考。