生物化学技术原理及应用

第五版前言

第四版前言

第三版前言

第一编概述

第一章 生命大分子物质的制备

第一节 材料的选择与处理

一、材料的选择

二、材料的处理

第二节 测定方法的确立

一、目的与要求

二、常用的测定方法

第三节 细胞破碎

一、机械破碎

二、溶胀和自溶

三、化学处理

四、生物酶降解

第四节 抽提

一、抽提的含义

二、抽提有效成分的影响因子

第五节 浓缩

一、沉淀法

二、吸附法

三、超过滤法

四、透析法

五、离心法

六、干燥法

第六节 纯化方案的设计与评价

一、纯化方案的设计

二、纯化方案的评价

第七节 有效成分纯度和性质的分析

第八节 应用实例

一、高纯度人转铁蛋白的制备

二、叶绿体的提取与45SRNA的制备

三、细菌质粒DNA的提取

思考题

参考文献

第二编纯化方法

第二章 沉淀法

第一节 基本原理与沉淀类型

一、基本原理

二、制备蛋白质

三、制备核酸

第二节 应用实例

一、脾磷酸二酯酶的纯化

二、细菌染色体DNA的制备

三、蔗糖酶的初步纯化

思考题

参考文献

第三章 吸附层析

第一节 吸附柱层析

一、常用术语

二、基本原理

三、吸附剂

四、洗脱液

五、层析柱的制备与层析操作

六、应用与实例

第二节 薄层层析

一、操作及注意事项

二、应用实例

第三节 聚酰胺薄膜层析

一、基本原理

二、应用实例

思考题

参考文献

第四章 疏水层析

第一节 基本原理

一、疏水作用

二、吸附剂

第二节 操作与应用

一、层析柱的制备

二、加样与洗脱

三、应用实例

思考题

参考文献

第五章 离子交换层析

第一节 基本原理

第二节 离子交换剂的分类及性质

一、分类

二、性质

第三节 离子交换剂与缓冲液的选择

一、离子交换剂的选择

二、缓冲液的选择

三、加样量的确定

第四节 操作

一、离子交换剂的处理、再生和转型

二、分离物质的交换

三、物质的洗脱与收集

第五节 应用

一、制备、纯化生命物质

二、测定蛋白质的等电点

思考题

参考文献

第六章 凝胶过滤

第一节 凝胶的分类及性质

一、葡聚糖凝胶

二、琼脂糖凝胶

三、聚丙烯酰胺凝胶

四、Sephacryl

五、Superdex

第二节 基本原理

第三节 操作

一、凝胶的选择和处理

二、凝胶柱的制备

三、加样与洗脱

四、凝胶柱的再生及保存

第四节 应用

一、脱盐和浓缩

二、分离生命物质

三、去除热源物质

四、测定分子质量

五、其他

思考题

参考文献

第七章 亲和层析

第一节 基本原理

第二节 操作

一、载体的选择

二、配体的选择

三、亲和吸附剂的制备

四、特异性吸附

五、分离大分子物质

六、亲和层析柱的再生

第三节 提高吸附剂的操作容量

一、在配体和载体间引入“手臂”

二、增加配体取代的程度

三、配体与载体衍生物以最少的键连接

四、载体多孔性的影响

五、其他

第四节 应用实例

一、纯化大分子物质

二、研究酶的结构与功能

三、实例

思考题

参考文献

第八章 聚焦层析

第一节 基本原理

一、多缓冲剂和多缓冲交换剂

二、聚焦层析原理

第二节 操作

一、多缓冲剂的选择

二、多缓冲交换剂用量的确定

三、多缓冲交换剂的处理

四、样品的准备

五、加样和洗脱

六、样品中多缓冲剂的去除

第三节 应用

一、分离模型蛋白质

二、分离复杂物质

三、鉴定某些酶的性质

思考题

参考文献

第九章 高效液相色谱

第一节 基本原理

一、高效液相色谱仪

二、固定相

第二节 反相高效液相色谱

一、固定相、流动相和色谱柱

二、纯化糖基化白蛋白肽片段

第三节 应用

一、定性和定量分析

二、测定酶活性

三、测定蛋白质分子质量

四、分离核酸和蛋白质

思考题

参考文献

第十章 固定化的酶与微生物

第一节 制备方法

一、固定化酶

二、固定化微生物

三、生物传感器

第二节 制品的性质

一、酶的相对活性

二、活性曲线与最适pH

三、稳定性

四、米氏常数

五、其他

第三节 应用实例

一、工业方面

二、医学方面

三、生化分析方面

四、应用实例

思考题

参考文献

第三编鉴定方法

第十一章 标记

第一节 核酸标记

一、基本原理

二、标记方法

第二节 蛋白质标记

一、机制

二、类型

三、标记物制备

第三节 标记物的纯化与鉴定

一、标记物纯化

二、探针的鉴定

第四节 应用实例

一、cDNA组学和蛋白质组学

二、激酶的磷酸化和脱磷酸化

三、蛋白质半衰期的测定

思考题

参考文献

第十二章 重组DNA

第一节 重组DNA的部件

一、工具酶

二、载体

三、目的基因

第二节 重组

一、黏性末端连接法

二、平端连接法

三、平黏连接法

四、TA连接法

五、同聚物加尾连接法

六、人工接头连接法

第三节 DNA扩增

一、重组DNA导入宿主细胞

二、重组子的筛选与鉴定

三、表达产物的纯化

第四节 应用实例

一、分离总RNA和mRNA

二、反转录合成第一链cDNA

三、PCR扩增及其产物纯化

四、PCR产物的克隆

五、重组质粒的提取及分析

思考题

参考文献

第十三章 DNA序列测定

第一节 双脱氧链终止法

一、基本原理

二、载体系统

三、测序试剂

四、测序操作

五、变性电泳

六、序列读取

第二节 PCR法

一、直接测序

二、循环测序

三、应用实例

第三节 化学降解法

一、测序原理

二、具体操作

第四节 新一代测序法

一、第二代测序法

二、第三代测序法

思考题

参考文献

第十四章 生物芯片

第一节 基因芯片

一、基本原理和工作流程

二、制备及操作

三、应用实例

第二节 蛋白质芯片

一、原理及特点

二、制备与操作

三、应用实例

第三节 芯片实验室

一、结构与制作

二、应用实例

思考题

参考文献

第十五章 聚合酶链反应

第一节 基本原理及操作系统

一、扩增DNA

二、扩增RNA

第二节 PCR的类型

一、普通PCR

二、原位PCR

三、反转录PCR

四、反向PCR

五、不对称PCR

六、巢式PCR

七、彩色PCR

第三节 应用

一、筛选目的基因

二、直接测序

三、标记DNA探针

四、寻找新基因

五、检测血液和组织成分

六、检测环境中的致病菌与指示菌

思考题

参考文献

第十六章 电泳

第一节 基本原理

一、泳动度概念

二、影响泳动度的因子

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

一、基本原理

二、不连续垂直板状和柱状凝胶电泳

三、连续的垂直板凝胶的电泳

四、线性和阶梯式梯度的板状凝胶电泳

五、双向电泳

第三节 琼脂糖凝胶电泳

一、缓冲液的配制

二、琼脂糖胶板的制备

三、加样和电泳

四、观察

第四节 应用

一、测定分子质量

二、测定蛋白质等电点

三、鉴定微量物质

四、诊断疾病（转移电泳）

思考题

参考文献

第十七章 免疫分析

第一节 抗体的性质、制备及纯化

一、抗体的性质

二、多克隆抗体的制备

三、单克隆抗体的制备

四、抗体的检测

五、抗体的纯化

第二节 抗原抗体反应与应用

一、凝集反应

二、免疫扩散

三、免疫电泳

四、固相免疫吸附（含ELISA）

五、免疫微球测定

思考题

参考文献

第十八章 气相色谱

第一节 基本原理

一、常用术语

二、塔板与速率理论

第二节 气相色谱仪的构造

一、载气流速的控制和测量

二、进样系统

三、恒温室

四、色谱柱

五、检定器

第三节 操作

一、操作要点

二、条件的选择

第四节 定性和定量检测

一、定性检测

二、定量检测

第五节 应用

一、分析蛋白质和氨基酸

二、分析核酸

三、分析糖类物质

四、分析脂肪酸

五、分析农药

思考题

参考文献

第十九章 分光光度法

第一节 基本原理

一、光谱

二、物质结构与光谱的关系

三、光吸收的基本规律——比尔朗伯定律

第二节 分光光度计的结构及类型

一、主要结构

二、类型

第三节 应用

一、定性分析

二、含量测定

三、参数测定

四、物质结构的分析

思考题

参考文献

第二十章 离心法

第一节 基本原理

一、沉降现象

二、离心力

三、离心法

四、沉降系数

第二节 离心机的类型及构造

一、制备型离心机

二、分析型离心机

第三节 应用

一、离心机的操作概述

二、应用实例

三、测定沉降系数

四、分离纯化生命物质

思考题

参考文献

参考文献

附录

中英文缩写词

《生物化学技术原理及应用（第五版）/普通高等教育“十二五”规划教材》是在第四版的基础上，结合近几年来科学进展修订而成。《生物化学技术原理及应用（第五版）/普通高等教育“十二五”规划教材》共分3编，20章：第一编概述蛋白质、核酸等生命大分子物质的制备方法及基本要点；第二编讲解从动物、植物和微生物材料中分离纯化上述物质的常见方法，如离子交换层析、疏水层析、亲和层析、聚焦层析、凝胶过滤、高效液相色谱、沉淀法等；第三编介绍鉴定生命大分子物质所涉及的相关方法，如同位素标记（包括DNA、RNA和蛋白质的标记）、基因重组、DNA序列测定、生物芯片、聚合酶链反应（包括DNA和RNA的扩增）、电泳（包括各种聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳等）、免疫分析（包括多克隆和单克隆抗体的制备、免疫扩散、各种免疫电泳、固相免疫吸附法——酶联免疫吸附法和免疫印迹法等）、薄层与薄膜层析、气相色谱、分光光度法和离心法等。《生物化学技术原理及应用（第五版）/普通高等教育“十二五”规划教材》在阐明各类方法基本原理的同时，还讲述了主要操作、注意事项及应用实例，在每章末尾附有思考题和主要参考文献，《生物化学技术原理及应用（第五版）/普通高等教育“十二五”规划教材》共有图、表360余幅。