酶活检测

引言

酶活检测

第一部分：高通量筛选

第二部分：遗传选择

第三部分：酶指纹分析

其他领域中的酶活检测

如何使用本书

参考文献

第一部分高通量筛选

1根据颜色变化定量检测水解酶的活性和选择性

1.1概述

1.2用显色底物的直接检测法

1.3使用耦联反应的间接检测法pH指示剂

1.3.1综述利用pH指示剂进行定量检测

1.3.2应用

1.3.3与其他方法对比

1.4选择性的估算和测定

1.4.1无参考化合物的选择性值的估算

1.4.2利用参考化合物定量测定选择性(QuickE及相关方法)

1.4.3应用

1.4.4优势与不足

参考文献

2检测酶对映体选择性的高通量筛选体系

2.1引言

2.2基于紫外/可见光光谱的检测方法

2.2.1用手性对硝基苯酯的动力学拆分来筛选脂肪酶或酯酶的检测方法

2.2.2基于酶耦联的紫外/可见光的脂肪酶和酯酶检测

2.2.3酶法测定对映体过剩

2.2.4基于紫外/可见光的酶免疫测定作为测量对映体过剩的一种手段

2.2.5其他基于紫外/可见光的ee-一检测方法

2.3使用荧光的检测方法

2.3.1基于伞形酮的体系

2.3.2用DNA微阵列进行荧光检测

2.3.3其他基于荧光的ee-检测方法

2.4基于质谱的检测方法

2.4.1使用同位素标记的MS检测方法

2.5基于核磁共振波谱的检测方法

2.6基于傅里叶转换红外光谱法的脂肪酶和酯酶检测方法

2.7基于气相色谱的检测方法

2.8基于HPLC的检测方法

2.9基于毛细管阵列电泳的检测方法

2.10基于圆二色光谱的检测方法

2.11基于表面增强共振拉曼散射的检测方法

2.12结论

参考文献

3氧化还原酶的高通量筛选方法

3.1引言

3.2各种氧化还原酶的高通量方法

3.2.1脱氢酶

3.2.2氧化酶

3.2.3加氧酶

3.2.4漆酶

3.3小结

参考文献

4检测方法的工业前景

4.1引言

4.2化学品定制中一个有效的生物催化剂筛选的先决条件

4.3基于光谱(紫外/可见光及荧光)的适用于CCM的筛选方法

4.3.1基于产物本身光谱性质的光谱方法

4.3.2基于产物连续转化的光谱法

4.4基于常规仪器检测的适应于CCM的筛选方法

4.4.1以流动-注射式NMR作为高通量筛选酶活的分析工具

4.4.2用于高通量筛选酶活的快速LC/MS方法

4.5结论

参考文献

第二部分遗传选择

5基于琼脂平板的检测

5.1引言

5.1.1酶的定向进化：筛选或选择

5.1.2琼脂平板筛选的一般性质

5.2基于易化筛选的方法

5.2.1酰胺酶

5.2.2酯酶

5.2.3糖苷合成酶

5.2.4半乳糖氧化酶

5.2.5单胺氧化酶

5.2.6P450单加氧酶

5.2.7类胡萝卜素的生物合成

5.2.8王物素连接酶

5.3体内选择法

5.3.1糖苷合成酶

5.3.2预苯酸脱水酶/分支酸变位酶

5.3.3■环化酶

5.3.4色氨酸的生物合成

5.3.5核糖醇脱氢酶

5.3.6内含肽

5.3.7氨酰-tRNA合成酶

5.4总结及展望

参考文献

6酶编码基因的高通量筛选和选择

6.1引言

6.2高通量筛选和选择的基础

6.3用噬菌体展示对酶进行高通量选择

6.4用细胞展示对酶进行高通量选择

6.5体内遗传筛选及选择

6.6筛选异源蛋白的表达和稳定性

6.6.1引言

6.6.2异源表达的筛选方法

6.6.3异源表达的定向进化近期实例

6.7体外区室化

6.8双乳液中的IVC

6.9总结评述

参考文献

7化学互补

7.1引言

7.2互补检测法

7.2.1引言

7.2.2早期的互补检测法

7.2.3互补法进行酶学研究

7.2.4互补法进行定向进化

7.3化学互补法的发展

7.3.1引言

7.3.2三杂交检测法

7.3.3化学互补法

7.4化学互补法的应用

7.4.1引言

7.4.2酶-抑制剂相互作用

7.4.3糖苷合成酶的进化

7.5结论

参考文献

8筛选新酶的分子途径

8.1引言

8.2在能培养的微生物中用核酸探针来探测编码酶的基因

8.2.1现有知识和应用

8.2.2探针技术的缺陷和创新方法的需求

8.3微生物的宏基因组：一个新的天然产物和酶的源泉

8.3.1获得不能培养的生物的多样性：生物群落DNA概念

8.3.2拆分代谢功能：BAC策略

8.3.3分析宏基因组文库：基于活性和基于序列的策略比较，特殊基因组的富集以及高通量筛选方法的应用

8.3.4宏基因组成果的延续

8.4总结评述

参考文献

第三部分酶指纹分析

9解脂酶的荧光探针

9.1引言

9.2用于酶活检测的荧光底物

9.2.1三酰甘油脂肪酶的活性检测

9.2.2二酰甘油脂肪酶的活性检测

9.2.3胆固醇酯酶的活性检测

9.2.4磷脂酶的活性检测

9.2.5神经磷脂酶的活性检测

9.3用于活性酶定量分析和功能酶指纹分析的荧光抑制剂

9.3.1分析脂肪酶和酯酶

9.3.2探测酶的生物物理性质

9.3.3基于亲和性的蛋白质组图谱绘制

参考文献

10水解酶的指纹分析方法

10.1引言

10.1.1一个酶一个底物

10.1.2酶活图谱

10.1.3鉴别微生物菌株的APIZYM系统

10.2水解酶的指纹分析

10.2.1用荧光和显色底物进行指纹分析

10.2.2用间接显色检测进行指纹分析

10.2.3鸡尾酒指纹分析

10.3用指纹数据进行分类

10.3.1指纹的表示

10.3.2数据的归一化

10.3.3酶指纹的等级聚类

10.3.4底物相似性的分析

10.4展望

参考文献

11蛋白酶底物图谱

11.1引言

11.2功能性蛋白酶突破-肽底物文库

11.2.1基于溶液的肽底物文库

11.2.2基于固体支持物的肽文库的合成与筛选

11.2.3确定蛋白酶底物特异性的基因方法

11.3大分子底物的鉴定

11.3.1鉴定大分子底物的基因方法

11.3.2鉴定蛋白酶底物的蛋白质组学方法

11.4结论

参考文献

12阵列上的酶活检测

12.1引言

12.2固定化策略

12.2.1共价和非共价固定化

12.2.2定点和非定点固定化

12.2.3肽链/小分子的定点固定化

12.2.4蛋白质的定点固定化

12.3检测酶活的微阵列方法

12.3.1用蛋白质阵列进行酶活检测

12.3.2用肽/小分子底物阵列进行酶活检测

12.3.3用其他阵列进行酶活检测

12.4结论

参考文献

中文索引

英文索引

　　本书由资深专家编著，涵盖了近年来酶活检测的大部分进展。全书分12章系统而详细地介绍了各种酶活检测方法，尤其是那些在高通量筛选、遗传选择和酶指纹分析中所使用的方法。其中，部分章节以某一检测方法为主线，介绍这一方法在多种酶的活性检测中的应用，其他章节则主要针对某一类重要的酶，介绍它的各种检测方法。书中除介绍检测方法的原理、基本流程外，还给出了非常详细的具体操作步骤以及应用实例，并列举了大量的相关文献。对于从事与酶相关的研究人员来说，本书是一本系统性、操作性和实用性很强的书。　　本书系统地介绍了在高通量筛选、遗传选择和酶指纹分析这三个领域中所使用的各种酶活检测方法，涵盖了近年来在酶活检测方面取得的大部分成果。各个章节脉络清晰，或是介绍某一普适检测方法(如琼脂平板法、化学互补法等)在多种酶的活性检测中的应用，或是列举针对某一类重要的酶(如氧化还原酶、蛋白酶等)的多种检测方法。书中对酶活检测方法的介绍非常细致，包括其原理、流程、操作步骤、优缺点等，并给出了大量的相关文献，便于读者深入查阅。　　本书由资深专家编著，各个章节由相应领域中杰出的学者或知名公司撰写，多内容、多学科、多角度地介绍了各种酶活检测方法。最值得一提的是，本书还用一章专门展望了检测方法的工业前景，这对于从事学术研究及工业应用的研究者来说都大有裨益。　　对于从事酶学研究、药物开发、生物催化、定向进化等相关领域的研究人员来说，该书是一本不可或缺的工具书。同时，该书对化学家、生物化学家以及生物技术工作者也极具参考价值。