基因工程实验指导

实验计划表

导论

1 基因文库的构建

1一l 染色体DNA的提取

1-2 总RNA和mRNA的提取

1-3 λ噬菌体DNA的提取

1-4 染色体DNA的部分消化

1-5 基因组文库的构建

1-6 cDNA合成

1-7 cDNA文库的构建

2 目的基因的获得

2-1 PCR扩增

2-2 核酸电泳

2-3 目的基因片段的获得

2-4 核酸探针的标记及检测

2-5 核酸探针筛选基因文库

2-6 反转录PCR

2-7 RACE PCR

2-8 反向PCR

2-9 Sitefinding-PCR

3 载体质粒的制备

3-1 质粒DNA的提取与纯化

3-2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定

4 扩增质粒的构建

4-1 限制性内切酶的酶切反应

4-2 凝胶电泳法进行DNA的分离与纯化

4-3 DNA片段的体外连接

4-4 T-A克隆

5 重组DNA导入宿主细胞

5-1 感受态细胞的制备

5-2 重组质粒的转化

5-3 外源基因在毕赤酵母中的转化与整合

6 重组子的筛选与鉴定

6-1 阳性克隆的筛选

6-2 DNA序列测定

6-3 序列同源性分析

6-4 DNA印迹

6-5 菌落原位杂交

6-6 荧光原位杂交

7 表达质粒的构建与诱导表达

7-1 表达质粒的构建与转化

7-2 RNA印迹

7-3 外源基因的诱导表达

7-4 蛋白质浓度的测定

7-5 SDS-PAGE

7-6 蛋白质印迹

8 蛋白质样品的分析

8-1 等电聚焦电泳

8-2 双向电泳

8-3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

8-4 酶联免疫吸附测定（ELISA）

8-5 蛋白质生物功能测定

8-6 酶活性的测定

9 工程菌的培养与目的产物分离

9-1 发酵条件的优化

9-2 包含体的复性

9-3 诱导表达蛋白质的分离沉淀

9-4 凝胶过滤层析

9-5 离子交换层析

9-6 亲和层析

附录1 简写

附录2 实验注意事项

附录3 如何撰写实验报告

附录4 常用碱基、氨基酸符号及缓冲液

附录5 大肠杆菌基因型

附录6 培养基与试剂的配制

附录7 实验仪器

参考文献

《基因工程实验指导（第2版）》根据基因工程研究的发展趋势，结合基因操作技术和分子生物学研究中经常使用的基本方法以及从自然界中克隆基因的基本思路，本教材以基因克隆为主线，包含了核酸与质粒的提取，基因文库构建与筛选，基因分离方法的确定，PCR法获得基因，克隆载体和表达载体的重组、重组子的鉴定，基因的表达，表达产物——蛋白质的纯化、鉴定等相关的实验技术内容。同一实验项目提供了多种可供选择的实验方法，并强调指出了实验中的注意事项，还对与实验相关的内容进行评议，附录中还包含试剂的配制等内容。为了能让实验有正确的理论指导，在每个实验前比较系统地介绍了与实验内容相关的基本原理，可为初学者提供有益的帮助，也为科研人员提供参考。