医药分子生物学实验教程

医药分子生物学实验目的与要求

医药分子生物学实验学生守则

上编基础部分

第1章实验室安全防护知识

1.1化学试剂安全防护知识

1.1.1有毒化学试剂

1.1.2腐蚀性化学试剂

1.1.3易燃易爆化学试剂

1.1.4强氧化性化学试剂

1.1.5放射性化学试剂

1.2辐射防护知识

1.2.1基本概念

1.2.2辐射防护的基本要求

1.2.3辐射防护的基本方法

1.2.4放射性同位素的实验室使用基本要求

1.3生物安全知识

1.3.1生物安全的含义

1.3.2微生物危险度评估

1.3.3实验室生物安全分级

1.3.4安全操作规程和管理制度

1.4用电安全及其他安全知识

1.4.1安全用电

1.4.2使用高压容器的安全防护

思考题

第2章分子生物学实验室标准及功能分区

2.1生物学约束

2.2物理学约束

2.3标准实验室组成

思考题

第3章分子生物学实验室常规仪器设备

3.1紫外分光光度计

3.1.1相关术语

3.1.2分光光度计的基本结构

3.1.3分光光度法的测量误差

3.1.4测量条件选择

3.1.5紫外分光光度法在分子生物学中的应用

3.2离心机

3.2.1离心分离方法

3.2.2离心机分类

3.2.3离心机配件转子的选用

3.2.4离心管的选用

3.3制水系统

3.3.1纯水和超纯水的定义

3.3.2国家标准实验用水

3.3.3水的纯化方法

3.3.4超纯水的制备

3.4PCR仪

3.4.1PCR技术原理

3.4.2PCR仪工作原理

3.5凝胶成像系统

3.6酶标仪

3.7微量移液器

3.7.1微量移液器的一般使用步骤

3.7.2微量移液使用注意事项

3.8pH计

3.8.1PB-20酸度计的使用方法

3.8.2酸度计使用注意事项

3.9生物安全柜

3.10超净工作台

3.11凝胶电泳系统

3.11.1电泳分类

3.11.2电泳仪的分类

3.11.3电泳槽的分类

3.11.4电泳仪的一般使用方法及注意事项

3.12高压蒸汽灭菌器

3.13液氮罐的使用

思考题

第4章实验基本技能与实验室常规基础知识

4.1常用器材的清洗处理

4.1.1常用器材的清洗

4.1.2常用洗涤液

4.2实验用品及实验环境的消毒灭菌

4.2.1物理方法

4.2.2化学方法

4.2.3实验环境与其他污染物的消毒

4.3细菌接种技术

4.3.1接种器具

4.3.2液体接种法

4.3.3平板接种法

4.3.4斜面接种法

4.3.5穿刺接种法

4.4细菌培养基本技术

4.4.1细菌培养概述

4.4.2常用细菌培养基

4.4.3菌种的保存与复苏

4.5细胞培养基本技术

4.5.1细胞培养的环境

4.5.2细胞培养的基本方法

4.5.3细胞计数及活力测定

4.5.4细胞的冻存及复苏

4.5.5体外培养细胞的分型

4.5.6培养细胞生命期

4.5.7体外培养细胞的种类和命名

4.6实验材料的采集与处理

4.6.1血液样品

4.6.2细胞样品

4.6.3组织样品

4.6.4尿液样品

4.7试剂及样品的保存

4.7.1试剂的保存

4.7.2核酸的保存

4.7.3酶的保存

4.8溶液的混匀

4.9实验室污染控制

4.9.1化学污染控制

4.9.2生物污染控制

4.9.3放射性污染控制

4.9.4锐器处理

思考题

下编学生实验部分

第5章核酸分离纯化

原理概述

实验一真核生物基因组DNA制备

方案一快速制备组织基因组DNA

方案二全血基因组DNA提取

实验二琼脂糖凝胶电泳

实验三总RNA的提取和电泳

方案一经典法(异硫氰酸胍一酸酚法)

方案二Trizol法

实验四RT-PCR

一、逆转录(RT)

二、PCR

实验五琼脂糖凝胶回收DNA片段

思考题

第6章基因克隆

6.1分子克隆策略

原理概述

实验六体外重组：目的基因与载体的连接

实验七感受态细胞的制备及转化

6.2重组体阳性克隆的筛选与鉴定

原理概述

实验八重组质粒转化大肠杆菌的初步筛选

实验九质粒的小量制备

实验十限制性内切核酸酶的酶切与鉴定

实验十一重组子的原位杂交

实验十二Southern印迹

思考题

第7章基因表达

7.1表达系统的选择

原理概述

实验十三重组质粒在原核生物中的诱导表达

7.2表达检测鉴定与蛋白纯化

原理概述

实验十四蛋白质样品制备

实验十五蛋白质的定量

实验十六SDS-PAGE蛋白质电泳

实验十七westemBlotting

实验十八免疫沉淀法检测表达蛋白

实验十九免疫荧光抗体法检测表达蛋白

实验二十免疫组化

实验二十一Ni2+柱亲和层析分离纯化带(His)6标签的重组蛋白

思考题

附录

附录1核酸及蛋白质数据

附录2分子克隆中常用缓冲液与试剂的配制

附录3常用储存液的配制

附录4细菌培养基与抗生素

附录5常用酶的配制

附录6溴化乙锭(EB)的净化和处理

附录7常用试剂的作用原理

附录8常用试剂与仪器供应商清单

主要参考文献

　　本书从基础的实验室安全知识、常规设备的原理及应用和实验室基本技能着手，直到实验技术，作了系统的介绍。实验操作部分可操作性强，实验中的策略与技巧是编写者们长期从事实验教学和研究中积累的经验。实验部分列出了配制试剂时应注意的安全事项，实用性强。原理和附录部分内容详尽，有助于读者理解有关的背景知识。本书内容简练，层次分明，覆盖面广，基础性和操作性强。　　本书在内容体系上划分为基础部分和学生实验部分。基础部分系统地介绍了实验室安全知识、常规分子生物学仪器操作和实验技术基础知识；学生实验部分则以基因克隆到表达的基本顺序作为主线，分为核酸制备、基因克隆和基因表达三大部分，包括目的基因的分离、RT-PCR、基因克隆、重组筛选、质粒提取、酶切与鉴定、转化以及在大肠杆菌中的表达和检测等21个互为连贯的实验。另外，本书的附录部分汇集了医药分子生物学实验的常用数据和相关技术。　　本书可作为高等院校医学和药学专业本科生、研究生实验教材，也可供生命科学相关专业的本科生、研究生、临床实验人员和研究人员参考。