基因工程实验

前言

实验1 基因组DNA的提取

实验1.1 植物基因组DNA的提取

实验1.2 动物基因组DNA的提取

实验1.3 细菌基因组DNA的提取：

实验1.4 酵母菌基因组DNA的提取

实验2 总RNA和mRNA的提取

实验2.1 Trizol法提取总RNA

实验2.2 异硫氰酸胍／酚一步法提取总RNA

实验2.3 总RNA提取试剂盒

实验2.4 mRNA的分离纯化

实验3 质粒DNA的提取

实验3.1 碱裂解法少量提取质粒DNA

实验3.2 少量质粒提取试剂盒

实验4 目的基因的获得

实验4.1 PCR扩增

实验4.2 反转录PCR

实验5 限制性内切酶的酶切反应

实验5.1 pUC18／19质粒DNA的EcoRI单酶解

实验5.2 HindⅢ和SalI对pUC18／19质粒DNA的双酶切

实验6 凝胶电泳法进行DNA的分离和纯化

实验7 DNA片段的体外连接

实验8 大肠杆菌感受态细胞的制备

实验9 组子的转化

实验10 菌落PCR筛选阳性重组子

实验11 重组质粒的酶切鉴定

实验12 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达

实验13 基因表达产物的检测分析：SDS-PAGE

实验14 Western Blotting（蛋白免疫印记）实验

实验15 Southern印迹实验

实验16 全长CDNA文库的构建

实验17 凝胶阻滞实验

实验18 染色质免疫共沉淀技术

参考文献

附录一 基因工程实验中的常用数据和换算关系

附录二 基因工程实验常用试剂、溶液和缓冲液

附录三 PCR实验引物设计原则

《基因工程实验》包括18个实验，分别是基因组DNA的提取、总RNA和mRNA的提取、质粒DNA的提取、目的基因的获得、限制性内切酶的酶切反应、凝胶电泳法进行DNA的分离和纯化、DNA片段的体外连接、大肠杆菌感受态细胞的制备、重组子的转化、菌落PCR筛选阳性重组子、重组质粒的酶切鉴定、外源基因在大肠杆菌中的诱导表达、基因表达产物的检测分析、Western.Blotting实验、Southern印迹实验、全长DNA文库的构建、凝胶阻滞实验和染色质免疫共沉淀技术。
　　《基因工程实验》内容清晰准确、简明扼要，便于指导操作。可作为综合性大学、师范和农林院校生物工程、生物技术、生物制药等专业基因工程实验指导用书。