基因工程原理与实验指导

第一部分 基因工程原理

第一章 绪论

第一节 引言

一、基因工程定义

二、基因工程发展史

第二节 基因工程的研究内容

一、技术路线

二、研究内容

第三节 基因工程的应用

一、基因工程药物

二、转基因动物

三、转基因植物

四、其他方面的应用

第四节 基因工程的安全性问题

本章问题

第二章 DNA重组工具酶

第一节 限制性内切酶

一、限制性酶的类型和命名

二、限制性酶的特性

三、酶切末端的类型

四、限制性酶的切割方式

五、影响限制性酶活力的因素

六、限制性酶的酶切反应体系

七、限制性酶的特殊类型

第二节 基因工程操作其他工具酶

一、连接酶

二、末端转移酶

三、碱性磷酸酶

四、多聚核苷酸激酶T4PNK

五、T7DNA聚合酶

六、逆转录酶

本章问题

第三章 基因工程的载体

第一节 质粒的一般特性

一、质粒的生物学特性

二、质粒DNA的构型

三、质粒DNA的提取

第二节 常用的质粒克隆载体

一、pBR322质粒

二、pUCl8／19质粒

三、TA克隆载体

第三节 常用的质粒表达载体

一、原核表达载体的表达元件

二、常用的原核表达载体

三、真核表达载体

第四节 噬菌体载体和柯斯质粒载体

一、噬菌体载体

二、柯斯质粒载体

本章问题

第四章 聚合酶链式反应

第一节 PCR原理

一、常规PCR

二、定量PCR

第二节 PCR操作及引物设计

一、PCR的反应体系

二、PCR扩增程序

第三节 引物设计原则及引物合成

一、引物设计原则

二、引物合成反应

第四节 电泳分离及纯化

本章问题

第五章 基因制备

第一节 直接分离基因

一、限制性内切酶分离法

二、双抗免疫分离法

三、根据蛋白质克隆基因法

四、同源克隆法

五、T-DNA插入失活法

第二节 PCR法扩增基因

一、套式PCR

二、锚定PCR

三、长程PCR

四、反向PCR

五、逆转录PCR

六、易错PCR

七、融合PCR

第三节 构建基因组文库法

一、基因组文库及cDNA文库概念

二、构建基因组文库的步骤

三、基因组文库的质量评价

第四节 噬菌体表面展示技术

一、噬菌体表面展示的概念

二、表面展示载体的原理

三、表面展示技术的不足

四、其他展示方法

第五节 酵母双杂交技术

一、酵母双杂交的概念

二、酵母双杂交的原理

三、酵母双杂交系统的组成

四、双杂交的步骤

第六节 化学合成法

一、基因的化学合成

二、化学合成方法

本章问题

第六章 DNA重组及导入受体细胞

第一节 DNA重组

一、DNA的连接反应

二、连接反应的注意事项

三、平末端的连接

第二节 重组DNA导入原核生物

一、感受态细胞的制备及转化

二、转化子的检测

第三节 重组DNA导入植物细胞

一、植物受体细胞类型及其特性

二、植物细胞的基因转化方法

三、转基因植物的筛选和鉴定

第四节 重组DNA导入动物细胞

一、动物细胞的特性

二、动物细胞的基因转化方法

本章问题

第七章 外源基因的表达

第一节 外源基因在大肠杆菌中的表达

一、常见的大肠杆菌表达系统

二、外源基因在大肠杆菌中表达的形式

三、外源基因在大肠杆菌中高效表达的策略

第二节 外源基因在酵母中的表达

一、酵母表达载体的基本结构

二、酵母表达系统的宿主

三、影响外源基因在酵母中表达的因素

本章问题

第八章 基因工程应用及其安全性

第一节 基因工程药物

一、基因工程激素类药物

二、基因工程细胞因子类药物

三、基因工程抗体

四、基因工程疫苗

第二节 转基因植物

一、抗虫害转基因植物

二、抗病毒转基因植物

三、抗逆转基因植物

四、提高植物的品质

第三节 转基因动物

一、建立人类疾病的动物模型

二、作为生物反应器

三、作为器官移植的动物供体

四、培育性状优良的家畜家禽

五、基因功能与调控的基础研究

第四节 基因治疗

一、基因治疗的策略

第二部分 基因工程实验指导

第一章 实验相关知识

第二章 基因工程实验原则

第三章 实验内容及操作方案

第四章 基因工程操作中容易出现的错误及对策

《基因工程原理与实验指导（高校教材）》的特点是：①适应理论学时缩短的需要，将内容减少。现在的大学生基本上在第四学年进入实习，理论学习安排在前三个学年，所以理论学时减少，而目前所用教材内容太多，学生没时间学习。②将基因工程原理和实验内容有机结合在一起。多数教材将大部分精力集中在理论知识的讲述方面，而基因工程是一门实验性学科，没有实验导致学生学习知识不全面。③加入最新的知识内容，适应进一步学习和工作的需要。