微生物学实验

第一章绪论1

一、实验须知1

二、微生物学实验室常用的器皿2

三、显微镜简介及实验中常用的仪器和设备6

第一篇普通微生物学实验

第二章微生物形态的观察技术18

实验1实验室环境和人体体表微生物的检测18

实验2细菌形态的观察21

实验3细菌的简单染色和革兰氏染色24

实验4细菌的芽孢、荚膜和鞭毛染色27

实验5微生物细胞核的染色和细菌染色体DNA的提取30

实验6细菌细胞壁的染色和质壁分离的观察31

实验7大肠杆菌λ噬菌体形态的电镜观察33

实验8放线菌和真菌形态的观察34

实验9微生物测微技术和计数37

第三章微生物的培养技术41

实验10培养基的制备与灭菌41

实验11微生物的纯种分离培养44

实验12生长谱法测定微生物的营养要求49

实验13大肠杆菌生长曲线的测定50

实验14大肠杆菌λ噬菌体效价测定和半乳糖发酵基因的转导51

实验15环境因素对微生物生长发育的影响53

实验16链霉素的效价测定56

实验17血清学反应——凝集反应、沉淀反应、琼脂扩散实验58

第四章应用微生物学技术62

实验18水的细菌学检查——细菌总数的测定62

实验19多管发酵法测定水中大肠菌群65

实验20微生物多糖——黄原胶的发酵和提取70

实验21黄原胶溶液性能的测定72

实验22产蛋白酶和淀粉酶芽孢杆菌的分离和酶活力检测74

实验23杀虫微生物——苏云金芽孢杆菌的深层发酵77

实验24细菌鉴定中常用的生理生化反应79

实验25利用BIOLOG系统进行微生物的分类鉴定84

实验26微生物发酵法制备生物降解材料——聚羟基脂肪酸酯（PHA）86

第二篇专业微生物学实验

第五章真菌学89

实验27真菌形态及各类孢子的观察89

实验28真菌孢子的萌发92

实验29丝状真菌生长的测定94

实验30不同碳源对真菌生长的影响96

实验31矿物质营养对真菌生长的影响97

实验32无机氮源对真菌生长的影响98

实验33理化因素对真菌生长的影响99

实验34酵母菌细胞形态及培养特征的观察100

实验35丝状真菌米曲霉营养缺陷型的筛选与鉴定102

实验36丝状真菌米曲霉原生质体的形成和再生104

实验37丝状真菌米曲霉原生质体融合及融合子的筛选106

实验38黄曲霉毒素的提取及测定109

实验39真菌生物碱的测定112

实验40真菌多糖的提取及测定114

实验41丝状真菌总DNA的提取和测定115

实验42丝状真菌深黄被孢霉总RNA的分离和检测117

实验43RTPCR扩增深黄被孢霉Δ6脂肪酸脱氢酶基因120

实验44深黄被孢霉Δ6脂肪酸脱氢酶基因的克隆123

实验45曲霉属（Aspergillus）群的分离和鉴定126

实验46青霉属（Penicillium）系的鉴定130

实验47镰刀菌属（Fusarium）组的分离和鉴定134

第六章微生物生理学137

实验48正交试验法对黄原胶发酵最佳培养基和培养条件的选择与优化137

实验49革兰氏阳性菌细胞壁的分离与纯化143

实验50酵母菌质粒DNA的分离提取144

实验51质粒DNA的纯度测定及定量分析146

实验52琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA148

实验53用限制性内切酶消化λ噬菌体DNA片段的电泳检测和分析150

实验54啤酒酵母非活性RNA的制备152

实验55啤酒酵母非活性RNA含量的测定153

实验56RNA的酶促降解154

实验575单核苷酸的纸电泳鉴定155

实验58酵母菌底物水平磷酸化合成ATP156

第七章微生物遗传学158

实验59苏云金芽孢杆菌ICP基因的检测158

实验60T4噬菌体基因组rⅡ区域不同基因突变的互补160

实验61大肠杆菌的高压电穿孔转化技术163

实验62噬菌体T4一步生长实验和Doermann实验165

第八章病毒学170

实验63病毒的细胞培养技术170

实验64病毒的纯化171

实验65病毒的毒力测定173

第九章免疫学176

实验66血清中IgG的分离（中性盐沉淀法）176

实验67抗体的精制（离子交换色谱法）177

实验68抗血清效价的测定179

实验69酶联免疫吸附试验181

第三篇分子微生物学实验

第十章分子微生物学基础实验184

实验70大肠杆菌（Ecoli）乳糖操纵子——酶的诱导及酶活性测定184

实验71λ噬菌体DNA的多种内切酶的物理图谱188

实验72SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定啤酒酵母菌胞外蛋白质分子量192

实验73啤酒酵母的脉冲电泳核型分析195

实验74大肠杆菌对紫外线辐射的修复机制202

实验75苏云金芽孢杆菌新型vip基因的RFLP分析204

实验76绿色荧光蛋白（GFP）的转化表达及免疫印迹检测206

实验77干扰素（IFN）的转化表达及双抗体夹心法检测211

附录214

附录一染色液的配制214

附录二培养基的制备217

附录三试剂和溶液的配制227

附录四实验中所用微生物学名235

附录五各国主要菌种保藏机构237

参考书目238

《微生物学实验》是学习生命科学本科生都必须掌握的一门基础实验课程。全书共编写了77个实验，涵盖本科生学习的基础微生物学实验26个，专业微生物学实验（微生物生理学，微生物遗传学，真菌学，病毒学，免疫学）43个，适合微生物学专业硕士研究生学习的分子微生物学实验8个。《微生物学实验》注重实验的基础性、科学性、系统性和先进性，强调无菌概念和无菌操作，同时注重培养学生的科学素养和实验技能。对分子微生物学实验的安排，只起入门的作用，以使学生建立最基本的概念和基础。
《微生物学实验》可供综合性大学、生命科学、医学、农学、师范类生物专业以及化工、食品等生物工程专业本科大学生作教材使用，也可供从事生命科学研究的有关科技人员参考。